[发明专利]肠球菌嗜铅蛋白组学分析及其应用

权利要求书

1.通过菌株吸附铅试验，探寻JT₁相对于M菌株的耐铅特性，得到两者的吸附率分别是55.83%及11.87%，且M菌株经分子生物学鉴定为屎肠球菌，与JT₁为同属革兰氏阳性细菌，菌株同源性极高，这2.菌株铅吸附的影响因素pH、温度、吸附时间以及菌株生长曲线、酸耐受试验来探究两株同属屎肠球菌JT₁、M的培养特征，最适吸附pH6.5～7.5，最适温度20～30℃，吸附时间5min后基本不变，M菌株在12h生长后达到稳定期、JT₁在18h生长后进入稳定期，最适生长pH为6.5。

2.二维图谱共检测出92个差异蛋白表达点，其中，JT₁菌株上有33个，M菌株图谱上有59个，从中筛选出的21个差异蛋白斑点成功检测出19种蛋白，对相关差异蛋白进行的蛋白质生物信息学分析可知，Pb²⁺对JT₁屎肠球菌生长代谢的很多方面都有影响，差异蛋白主要的代谢促进作用包括：渗透压胁迫蛋白和抗氧化蛋白对细胞表面膜蛋白结构进行调控，有效地减少外界刺激对其产生的影响，及时抵抗氧化带来的损伤；五种糖代谢的必需氧化还原酶保障了菌体有氧呼吸的正常进行，及时消耗菌体内多余的活性氧，确保细胞结构不受到氧化损伤；αβ结构域蛋白水解酶涉及到铁硫簇的生物合成，当细胞体受到外界刺激的时候，铁硫簇能够修复和重组相应的调节酶从而解除Pb²⁺胁迫下对菌体细胞的活性氧化损伤；核黄素能生成黄素酶-谷胱甘肽还原酶，具有抗氧化活性，有效的解除Pb²⁺对菌体结构的氧化损伤；而Cysteine synthase A为JT₁菌株耐铅性的关键蛋白，符合半胱氨酸以及谷胱甘肽的理化性质，同时作为JT₁对菌株M的上调蛋白，灰度值之比达到了0.000386，P值为0.01，是所有显著差异蛋白点中最为合理的蛋白点。

3.在体外环境中屎肠球菌JT₁的菌体细胞和无细胞提取物这两种样品对超氧阴离子(O₂•)、羟自由基(HO·)、亚铁离子(Fe²⁺)和DPPH自由基的清除能力，屎肠球菌JT₁的无细胞提取物对O₂•的清除率为6.132%；对HO·的清除率为72.772%；对Fe²⁺的螯合率95.523%%；对DPPH自由基的清除率为8.281%，屎肠球菌JT₁的菌体细胞对O₂•的清除率为17.246%；菌体细胞液对HOˑ的清除率为25.940%；菌体细胞液对Fe²⁺的螯合率为50.110%；对DPPH自由基的清除率为23.873%，无细胞提取物清除羟自由基(HOˑ)和螯合亚铁离子(Fe²⁺)的能力比菌体细胞的强，菌体细胞对超氧阴离子(O₂•)和DPPH(1.1-二苯基苦基苯肼)的清除能力比无细胞提取物的强。