[发明专利]一种基于目标区域捕获的甲基化突变检测方法及试剂盒

权利要求书

1.一种基于目标区域捕获甲基化突变检测方法，其特征在于，主要包括以下步骤：

(1)提取全血游离DNA，经过末端修复、末端加“A”、连接illumina测序平台专用index测序接头，构建游离DNA基因文库；

(2)将步骤(1)得到的游离DNA基因文库经重亚硫酸盐处理后，进行PCR扩增，通过AMPure XP磁珠纯化；

(3)将步骤(2)纯化的产物进行甲基化探针液相杂交，对混合物中的DNA甲基化片段进行捕获，然后经纯化得到捕获后产物片段；

(4)对步骤(3)所得的产物片段进行扩增，然后利用磁珠对扩增产物进行纯化回收，得到上机文库；

(5)使用Illumina测序平台进行测序，通过生物信息学对得到实验数据进行分析，获得目标区域内甲基化突变情况。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中所述的游离DNA通过Circulating Nucleic Acid Kit试剂盒提取获得；所述的末端修复、末端加“A”通过End RepairA-Tailing Enzyme Mix反应体系完成。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)中所述的重亚硫酸盐处理通过Qiagen EpiTect Fast Bisulfite Kit试剂盒完成。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(3)中所述的甲基化探针液相杂交捕获的目标区域为610个与肿瘤发生发展密切相关的基因启动子区域。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(4)中所述的扩增通过PCR反应进行。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(5)中所述的Illumina测序平台包括Illmina NextSeq 500、Illumina Hiseq2000、Illumina Hiseq2500和IlluminaMiseq。

7.一种用于权利要求1-6任一项所述的基于目标区域捕获甲基化突变检测方法的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括以下成分：游离DNA文库构建的试剂，重亚硫酸盐处理、扩增及纯化回收试剂，甲基化探针液相杂交的试剂，文库扩增富集试剂。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述的游离DNA文库构建的试剂主要包括游离DNA提取试剂、文库构建中的末端修复、加“A”及连接接头所需要的酶、缓冲液及illumina测序平台专用测序接头；所述的重亚硫酸盐处理、扩增及纯化回收试剂主要包括重亚硫酸盐处理使用的重亚硫酸盐、DNA保护缓冲液、清洗液，PCR扩增反应体系以及磁珠纯化所用的洗脱缓冲液。

9.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述的甲基化探针液相杂交的试剂主要包括捕获探针、捕获磁珠、洗脱缓冲液；所述的文库扩增富集试剂主要包括文库扩增所需要的酶及缓冲液，以及产物回收纯化所需要的磁珠。

10.权利要求7-9任一项所述的试剂盒在泛癌种早筛中的应用。