[发明专利]一种小分子药物血药浓度的检测方法

说明书

本发明涉及光纤生物传感技术领域，公开了一种小分子药物血药浓度的检测方法。本发明提供的小分子药物血药浓度的检测方法，包括制备光纤探针、分别获得参照样本和待测样本、参照样本的竞争性结合和信号放大、获得“小分子药物浓度‑相对抑制性”标准曲线、待测样本的竞争性结合和信号放大、获得待测样本的小分子药物浓度等步骤。本发明基于光纤生物膜干涉技术、直接竞争性结合免疫法与信号放大策略，针对小分子药物的血药浓度建立了一种快速、高灵敏的光纤生物传感检测技术。

技术领域

本发明涉及光纤生物传感技术领域，特别涉及一种小分子药物血药浓度的检测方法。

背景技术

癫痫是一类慢性、反复性、突然发作性大脑功能失调，是一种脑神经元突发性异常高频率放电并向周围扩散引起的慢性中枢神经系统疾病。癫痫会对病人的身心造成严重影响，而卡马西平(carbamazepine,CBZ)作为治疗癫痫局限性发作和大发作的常见小分子药物，其有效血药浓度范围窄、个体差异大，血药浓度与其疗效和毒性、不良反应关系密切，经验用药难以控制血药浓度在安全有效的范围内。为了帮助减少毒副作用、增加疗效，对患者进行卡马西平的血药浓度检测是临床上一项很有意义的研究工作。血药浓度检测在癫痫治疗应用中能够协助医生及时发现抗癫痫药物过量所致的中毒反应，还能为判断中毒程度、调整用药方案提供科学的依据，缩短摸索用药剂量的时间，为具有特殊药代动力学的患者制订符合自身特点的给药方案。

目前，常见的卡马西平血药浓度检测方法主要有酶联免疫吸附剂测定和高效液相色谱法，两者均有一定的技术缺陷。前者可高通量检测、但受温度和时间影响较大，重复性不好、且耗时几个小时；后者灵敏度高，能够解决其他分析方法无能为力的复杂样品分析，但血液样品前处理过程过于繁复，需经专业人员操作仪器。

在本申请中用到的一些缩略语、英文和关键术语定义如下：

1.HRP:Horseradish Peroxidase,辣根过氧化物酶；

2.DAB:3,3’-diaminobenzidine tetrahydrochloride,3,3-二氨基联苯胺四盐酸。

发明内容

本发明的目的在于提供一种小分子药物血药浓度的检测方法，通过对生物层干涉技术有效的信号放大，实现对小分子药物血药浓度的快速、高灵敏与全自动化检测。

为解决上述技术问题，本发明的第一方面提供一种小分子药物血药浓度的检测方法，包括：

(1)制备光纤探针：将生物素化的特异性小分子药物单克隆抗体固定至链霉亲和素光纤的表面，得到光纤探针；

(2)分别获得参照样本和待测样本：

将不同浓度的小分子药物标准品添加到血液对照品中，得到若干个具有不同小分子药物浓度的参照样本；

获取小分子药物血药浓度待测者的血液样本，得到待测样本；

(3)参照样本的竞争性结合和信号放大：

将所述若干个具有不同小分子药物浓度的参照样本分别与小分子药物 -HRP偶联物等体积混合，得到若干个参照样本与小分子药物-HRP偶联物的混合液，对所述若干个参照样本与小分子药物-HRP偶联物的混合液进行如下竞争性结合和信号放大步骤：

竞争性结合：使所述光纤探针接触所述参照样本与小分子药物-HRP偶联物的混合液，参照样本中的小分子药物和小分子药物-HRP偶联物竞争性地与所述光纤探针上的特异性小分子药物单克隆抗体结合；

信号放大：然后使所述光纤探针接触HRP生物显色剂，结合于所述光纤探针上的HRP与所述HRP生物显色剂高亲和力结合，产生金属沉淀，带来光纤表面的光谱红移，得到参照样本的光谱位移；

(4)获得“小分子药物浓度-相对抑制性(％)”标准曲线：