[发明专利]一种突变型蛋白酶3和生物素的偶联物及其制备方法及应用

权利要求书

1.一种突变型蛋白酶3和生物素的偶联物，其特征在于，所述的突变型蛋白酶3是在野生型蛋白酶3的基础上，氨基酸序列的36位点、48位点或74位点的氨基酸突变为带有叠氮基团和炔基中的一者的非天然氨基酸，所述的野生型蛋白酶3的氨基酸序列为SEQ ID No.9所示的氨基酸序列，所述的生物素为具有炔基或叠氮基团中的另一者的生物素衍生物，所述的突变型蛋白酶3和生物素的偶联物通过炔基和叠氮基团之间形成的化学键相连。

2.根据权利要求1所述的突变型蛋白酶3和生物素的偶联物，其特征在于，所述的非天然氨基酸为侧链带有叠氮基或炔基的苯丙氨酸衍生物、酪氨酸衍生物、谷氨酸衍生物、谷氨酰胺衍生物、丙氨酸衍生物、半胱氨酸衍生物、精氨酸衍生物、赖氨酸衍生物；

和/或，所述的生物素衍生物为分子量为400～500，臂长为的长臂生物素的衍生物。

3.根据权利要求1所述的突变型蛋白酶3和生物素的偶联物，其特征在于，所述的非天然氨基酸为

和/或，所述的生物素衍生物为

4.一种如权利要求1至3中任一项所述的突变型蛋白酶3和生物素的偶联物的制备方法，其特征在于，所述的突变型蛋白酶3和所述的生物素衍生物在硫酸铜存在的条件下进行点击化学反应，然后使用乙二胺四乙酸终止反应，得到所述的突变型蛋白酶3和生物素的偶联物。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述的点击化学反应在中性PBS缓冲液中进行；和/或，所述的点击化学反应的反应温度为2～6℃；和/或，所述的突变型蛋白酶3在反应体系中的初始浓度为4～8mM；和/或，所述的生物素衍生物在反应体系中的初始浓度为12～18mM；和/或，所述的硫酸铜在反应体系中的浓度为0.8～1.5mM；和/或，所述的乙二胺四乙酸在反应体系中的浓度为0.8～1.5mM。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述的制备方法还包括利用正交tRNA及氨酰tRNA合成酶蛋白质翻译系统将所述的非天然氨基酸定点插入蛋白酶3肽链中得到所述的突变型蛋白酶3。

7.一种磁微粒化学发光检测试剂，其特征在于，所述的磁微粒化学发光检测试剂为权利要求1至3中任一项所述的突变型蛋白酶3和生物素的偶联物包被的链霉亲和素磁珠。

8.根据权利要求7所述的磁微粒化学发光检测试剂的制备方法，其特征在于，将所述的突变型蛋白酶3和生物素的偶联物和所述的链霉亲和素磁珠在中性PBS缓冲液中于20～45℃下反应得到所述的磁微粒化学发光检测试剂。

9.一种用于检测蛋白酶3抗体的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括权利要求1至3中任一项所述的突变型蛋白酶3和生物素的偶联物或权利要求7所述的磁微粒化学发光检测试剂。