[发明专利]用于检测靶标核酸分子的可视化检测体系、试剂或试剂盒及检测方法

说明书

本发明涉及用于检测靶标核酸分子的可视化检测体系、试剂或试剂盒及检测方法，其中用于检测靶标核酸分子的可视化检测体系，包含向导ssDNA(gDNA)，死亡基因编辑酶Clostridium perfringens Argonaute(dAGO)和呈递脱氧核酸(DNAer)。与现有技术相比，本发明核酸检测方法灵敏度高、特异性好、价格低廉，可广泛应用于分子医学诊断、食品安全检测以及环境监测等诸多领域。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种基于原核死亡AGO核酸酶(dAGO)用于病毒的可视化检测方法及其应用。

背景技术

病毒一直对人类构成威胁，病毒的核酸包括双链DNA(dsDNA)、单链DNA(ssDNA)、双链RNA(dsRNA)、正单链RNA(+ssRNA)、负单链RNA(-ssRNA)五种不同类型。例如TT病毒(TTV)便是1997年日本学者首先从一例因输血引起转氨酶升高患者的血清中发现的ssDNA病毒，全世界约有10％的TTV感染者，所以对于该病毒的检测研究十分必要。DNA是目前诊断TTV感染的主要手段，由于不同基因区碱基序列的保守性具有一定区别，故应用PCR法仍是目前检测TTV的常用手段。几年来国内外这者在TTV研究中做了不少工作并取得一定成绩，但由于尚处于起步阶段，因此丰富相关的检测方法对于TTV病毒的研究很有意义。

AGO蛋白作为可剪切靶位点的核酸酶，且不受限于PAM序列，理论上比Cas9的精确性更高，因此对AGO蛋白进行基因编辑等方面的开发得到关注。

CN201810291873.0公开了一种基于原核Argonaute蛋白的核酸检测方法及其应用。具体地，该发明提供了一种用于检测靶标核酸分子的检测体系，该体系包含向导ssDNAs，基因编辑酶Pyrococcus furiosus Argonaute(PfAgo)和荧光报告核酸。但是该技术主要依靠向导ssDNAs，基因编辑酶Pyrococcus furiosus Argonaute(PfAgo)和荧光报告核酸体系的检测方法是基于高温Argonaute的核酸检测方法，反应条件较苛刻，需要实验室具备PCR仪，Q-PCR仪等贵重仪器，且缺乏最直观的可视化检测过程。

目前，利用PCR法仍是目前检测TTV的常用手段，反应条件较苛刻，需要实验室具备PCR仪，Q-PCR仪等贵重仪器，且缺乏最直观的可视化检测方法。

发明内容

本发明的目的就是为了解决上述问题而提供一种基于对目标DNA的灵敏度高、特异性好、室温下适用、肉眼可视化的用于检测靶标核酸分子的可视化检测体系、试剂或试剂盒及检测方法。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

在本发明的第一方面，提供了一种用于检测靶标核酸分子的可视化检测体系，该体系包含：

(a)向导ssDNA(gDNA)；

(b)突变剪切活性位点的死亡基因编辑酶Clostridium perfringens(dAGO)；和

(c)呈递脱氧核酸(DNAer)，所述呈递脱氧核酸带有生物素标记；

其中，所述的靶标核酸分子为靶标DNA。

在另一优选例中，所述的向导ssDNA为5’-磷酸化的单链DNA分子。

在另一优选例中，所述的向导ssDNA的长度为n个碱基，且n≥14。

在另一优选例中，所述的n≤100，较佳地≤80，更佳地≤60。

在另一优选例中，所述的向导ssDNAs的长度为14-60nt，较佳地16-40nt。

在另一优选例中，所述AGO酶来源于古菌Clostridium perfringens。

在另一优选例中，所述的AGO酶包括野生型和突变型的CpAgo。