[发明专利]用于检测靶标核酸分子的可视化检测体系、试剂或试剂盒及检测方法有效
申请号: | 202111437007.6 | 申请日: | 2021-11-30 |
公开(公告)号: | CN114085892B | 公开(公告)日: | 2023-07-28 |
发明(设计)人: | 冯雁;李蓉 | 申请(专利权)人: | 上海交通大学 |
主分类号: | C12Q1/6844 | 分类号: | C12Q1/6844 |
代理公司: | 上海科盛知识产权代理有限公司 31225 | 代理人: | 蒋亮珠 |
地址: | 200240 *** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 用于 检测 靶标 核酸 分子 可视化 体系 试剂 试剂盒 方法 | ||
1.一种用于检测靶标核酸分子的试剂盒,其特征在于,该试剂盒包括以下试剂:
(a)向导ssDNA;所述的向导ssDNA为5’-磷酸化的单链DNA分子;所述的向导ssDNA的长度为14-60nt;
(b)突变剪切活性位点的死亡基因编辑酶dAGO;所述的死亡基因编辑酶dAGO是将古菌Clostridium perfringens Argonaute的第608位氨基酸D突变为A,和
(c)呈递脱氧核酸DNAer,所述的呈递脱氧核酸DNAer的长度为15-40nt,生物素标记基团位于所述呈递脱氧核酸DNAer的3’端;
其中,所述的靶标核酸分子为靶标DNA;
所述的靶标核酸分子与所述呈递脱氧核酸DNAer进行退火操作后,产生Target-DNAer复合物;所述的Target-DNAer复合物与所述的向导ssDNA是互补的,dAGO酶引导所述的Target-DNAer复合物与所述的向导ssDNA互补结合后,通过加入链霉亲和素-辣根过氧化物酶和3,3’,5,5’-四甲基联苯胺TMB,从而产生可检测的信号。
2.根据权利要求1所述的一种用于检测靶标核酸分子的试剂盒,其特征在于,所述的靶标核酸分子的不同分型对应的突变位点在向导ssDNA的第10和11位。
3.根据权利要求1所述的一种用于检测靶标核酸分子的试剂盒,其特征在于,所述的靶标DNA为单链DNA。
4.一种非疾病诊断目的的检测样本中靶标核酸分子的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(a)提供权利要求1所述的用于检测靶标核酸分子的试剂盒;和
(b)将所述试剂盒的试剂与待检测的样本在25-37℃温度下进行反应,从而形成第一反应溶液;
(c)对所述第一反应溶液进行光密度检测,从而获得光密度信号值。
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