[发明专利]miR-208a-3p反义核酸在治疗心肌缺血再灌注损伤中的应用

说明书

本发明通过提出miR‑208a‑3p反义核酸在治疗心肌缺血再灌注损伤中的应用，并公开miR‑208a‑3p反义核酸的提取方法，通过小鼠对比实验，明确miR‑208a‑3p反义核酸在心肌缺血再灌注损伤中起的治疗作用，解决传统心肌缺血再灌注损伤药物治疗效果不理想的问题，为心肌缺血再灌注损伤的治疗开辟更广阔的前景。

技术领域：

本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种miR-208a-3p反义核酸在治疗心肌缺血再灌注损伤中的应用。

背景技术：

心肌缺血后再灌注损伤(MIRI)指冠状动脉部分或完全急性阻塞后，在一定时间又重新获得再通时，缺血心肌虽然得以恢复正常灌注，但其组织损伤反而呈进行性加重的病理过程。缺血期引起的心肌超微结构、能量代谢、心功能和电生理等一系列损伤性变化，在血管再通后表现得更为突出，甚至可发生严重的心律失常而导致猝死。心内直视手术、冠状动脉搭桥术、冠状动脉腔内成形术、溶栓术后以及心肌内侧支循环血量突然增加等情况下，都可发生心肌缺血后再灌注损伤。对其发生机制认为主要与细胞内氧自由基的大量产生、钙离子超负荷、白细胞的炎症作用及高能磷酸化合物缺乏等有关。随着冠脉介入治疗的普及，心肌缺血再灌注损伤成了一个不可避免的问题。针对心肌缺血再灌注损伤，相关技术中常用钙离子拮抗剂、β-受体拮抗剂、氧自由基清除剂等药物，来预防和控制因心肌缺血再灌注损伤所诱发心律失常、心猝死和心脏顿抑所致的心功能减退等心血管减退等心血管疾病的发生，但至今未获得真正满意的结果。因此，研发能减轻心肌缺血再灌注损伤的药物具有重大意义。

microRNA(miRNAs)是一类广泛存在于真核生物和病毒中的一类非编码小RNA，约由18-22个核苷酸构成。miRNAs是基因表达的负性调节者，可与靶基因3，端非编码区mRNA的碱基互补配对形成沉默复合体(RISC)，进一步降解mRNA或阻遏其翻译。由于其自身是一类非编码RNA，自身不具备翻译蛋白能力。近年多项研究表明研究表明，miRNAs直接参与心肌细胞死亡的调控，从而影响心肌缺血损伤的严重程度。有些miRNA也具备组织特异性，即它只在特定细胞中表达而不在其他组织器官中表达。miR-208a作为一类微小RNA，是特异性表达在心脏组织中，尤其是心肌细胞发挥作用，其主要是以3p段发挥作用。本设计的反义核酸可以在心肌细胞特异性结合miR-208a-3p，抑制其功能达到治疗效果，而且由于miR-208a-3p只表达在心脏中不表达在其他器官。特异性的反义核酸只能针对miR-208a-3p，不会影响其他器官的功能。解决了传统药物非特异性以及副作用大的情况。

发明内容：

(一)解决的技术问题

针对上述背景，本发明通过提出miR-208a-3p反义核酸在治疗心肌缺血再灌注损伤中的应用，旨在解决传统心肌缺血再灌注损伤药物治疗效果不理想的技术问题，为心肌缺血再灌注损伤的治疗开辟更广阔的前景。

(二)技术方案

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

miR-208a-3p反义核酸在治疗心肌缺血再灌注损伤中的应用，所述miR-208a-3p的自身核苷酸序列为miRBase中登记号为IDs:MIMAT0000520的序列。

所述miR-208a-3p反义核酸序列和所述miR-208a-3p的自身核苷酸序列形成互补序列；

所述miR-208a-3p反义核酸的序列为TATTCTGCTCGTTTTTCGAACATT。

进一步地，所述miR-208a-3p反义核酸的提取方法为：

S1、脱保护

使用二氯乙酸或者三氯乙酸的二氯甲烷溶液去除寡核苷酸上的5”-DMT保护基团，暴露5”-OH，以供下一步偶联；

S2、偶联