[发明专利]miR-208a-3p反义核酸在治疗心肌缺血再灌注损伤中的应用

权利要求书

1.miR-208a-3p反义核酸在治疗心肌缺血再灌注损伤中的应用。

2.根据权利要求1所述的miR-208a-3p反义核酸在治疗心肌缺血再灌注损伤中的应用，其特征在于，所述miR-208a-3p的自身核苷酸序列为miRBase中登记号为IDs:MIMAT0000520的序列。

3.根据权利要求2所述的miR-208a-3p反义核酸在治疗心肌缺血再灌注损伤中的应用，其特征在于，所述miR-208a-3p反义核酸序列和所述miR-208a-3p的自身核苷酸序列形成互补序列，所述miR-208a-3p反义核酸的序列为TATTCTGCTCGTTTTTCGAACATT。

4.根据权利要求1所述的miR-208a-3p反义核酸在治疗心肌缺血再灌注损伤中的应用，其特征在于，所述miR-208a-3p反义核酸的提取方法为：

S1、脱保护

使用二氯乙酸或者三氯乙酸的二氯甲烷溶液去除寡核苷酸上的5”-DMT保护基团，暴露5”-OH，以供下一步偶联；

S2、偶联

待合成的亚磷酰胺单体与活化剂四唑混合并进入合成柱，形成亚磷酰胺四唑活性中间体，脱保护的5”-OH会与亚磷酰胺四唑活性中间体，形成新的磷氧键，并脱去四唑，在这一步核苷酸链得到延伸；

S3、氧化

偶联反应生成的亚磷酯键，易被酸、碱水解，将此处三价磷氧化(硫化)为五价的磷，被氧化后形成的磷酸二酯(或硫代膦酸二酯)键，磷酸二酯键(或硫膦二酯)上有一个2-氰乙基保护，使磷酸二酯键在后续的合成中更稳定；

S4、加帽

为了防止5”-OH与下一个循环加入的亚磷酰胺单体发生偶联反应，产生N-1杂质，对未参与偶联的5”-OH加帽：使用乙酸酐和N-甲基咪唑形成乙酰化试剂，与未参与偶联反应的5”-OH形成酯键；

由于传统的反义核苷酸抑制miRNA效果差以及稳定性差，在此基础上，对每个核苷酸的呋喃糖2‘碳加上甲基，两端用磷硫酰修饰，并在3’处加入TT序列以稳定反义核酸；

设计序列为TATTCTGCTCGTTTTTCGAACATT，形成粉末后-20℃保存，使用时用生理盐水0.2mL溶解。

5.根据权利要求1所述的miR-208a-3p反义核酸在治疗心肌缺血再灌注损伤中的应用，其特征在于，所述miR-208a-3p反义核酸的应用方法为：无需和其他药物配比，将保存在-20℃中的所述miR-208a-3p反义核酸粉末取出，2000G瞬时离心后以无菌生理盐水溶解并以50mg/Kg使用量鼠尾注射进入手术后小鼠体内，小鼠注射中溶液总体积不超过0.2mL，防止小鼠由于注射溶液过多诱发心衰。