[发明专利]一种高纯度CD56+γδT细胞及其制备方法和用途

说明书

本发明提供一种高纯度CD56+γδT细胞，一种高效诱导和大量扩增CD56+γδT细胞的培养方法，和将CD56+γδT细胞用于治疗肺癌、胃癌、胰腺癌和膀胱癌等癌症的用途。所培养的CD56+γδT细胞增殖能力强，杀瘤能力强，可以较好地解决γδT细胞来源问题，并有应用于临床的前景。

技术领域

本发明涉及免疫治疗领域，具体涉及一种高纯度CD56+γδT细胞、高效诱导和扩增所述高纯度CD56+γδT的培养基和培养方法、以及所述高纯度CD56+γδT细胞治疗肿瘤的用途。

背景技术

免疫系统对癌症的先天和获得性免疫可以在称为癌症免疫监视的过程中识别和破坏新生的肿瘤细胞。正常细胞受致癌物和其他遗传毒性损害以及内在的肿瘤抑制机制(例如p53，ATM，Ras)失效而转化为肿瘤细胞。这些肿瘤细胞表达应激诱导的分子，例如表面钙网蛋白，MHC I类分子的肿瘤抗原，NKG2D配体等，它们可分别被免疫细胞识别。T淋巴细胞是免疫系统的重要组成部分，根据T细胞表面受体(TCR)不同，T淋巴细胞可以分为αβT和γδT。αβT主要参与获得性免疫，γδT主要参与先天性免疫。目前主要的CART产品以αβT为主，将抗原抗体的高亲和性和T淋巴细胞的杀伤作用相结合，通过构建特异性嵌合抗原受体，经基因转导使T淋巴细胞表达这种嵌合抗原受体，特异性地识别靶抗原从而杀伤靶细胞。与αβT细胞相比，γδT具有以下优势，有望成为通用CART的候选药物。

1.大多数癌细胞除了具有抗原和信号外，还能分泌一种叫做IPP(异戊烯焦磷酸)的物质。目前，在免疫细胞中，只发现γδT细胞具有这种识别IPP的功能，在激活和增殖细胞后可攻击癌细胞。

2.γδT细胞肿瘤浸润性强，研究发现TIL中γδT数量丰富，已在多种类型的癌症(包括结直肠癌，乳腺癌，前列腺癌，卵巢癌和肾细胞癌)中分离得到γδT细胞性质的TIL。在常规药物难以进入的肿瘤，例如胰腺癌中，γδT，浸润性是影响疗效的主要因素之一。

3.γδT作为先天免疫细胞，反应比αβT细胞更快，在没有CAR的情况下，对肿瘤细胞也能具有杀伤能力，因此不受常规的突变影响，还可以绕过最常见的癌症免疫逃逸机制之一——表面MHC I类分子的下调。

4.αβT识别抗原需要依赖HLA分子的提呈，不同个体HLA系统具有特异性，除非供者和受体的HLA分子精确匹配，否则供者αβT将与受体发生免疫排斥反应。而γδT细胞识别抗原不依赖HLA分子的提呈，不会将患者的身体识别为外来物，因此不会引起GvHD(移植物抗宿主病)。

5.γδT细胞对普通细胞更安全，尚没有与γδT细胞疗法相关的严重的不良反应的报道，而αβT会有“脱靶”现象，产生不良反应。

CD56是一种神经细胞粘附分子，通常被认为是自然杀伤细胞(NK)的表型标志物，NK细胞通常定义为CD3-CD56+，而CD3+/CD56+细胞通常被命名为NKT或NKT样细胞，常见的NKT多为αβT。到目前为止，CD56细胞的表达对淋巴细胞的功能尚不够清楚，可能与淋巴细胞与靶细胞之间的粘附有关。CD56+γδT细胞表现出来的优点包括：

1、杀伤肿瘤细胞能力更强。

2、主要以穿孔素颗粒酶途径杀伤靶细胞，速度快。

3、CD56+γδT细胞的CD16表达水平高于CD56-γδT细胞，因此CD56+γδT细胞的抗体依赖的细胞细胞毒性作用(ADCC，antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity)效应更强。

4、CD56+γδT对CD95抗体的敏感性低于CD56-γδT细胞，因此CD56+γδT细胞的抗凋亡能力更强。