[发明专利]一种pH敏感脂质体及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种pH敏感脂质体，其特征在于，所述pH敏感脂质体由以下药物和脂质体载体组成：(2,3-二油酰基-丙基)-三甲基铵-氯盐，二油酰磷脂酰胆碱，胆固醇琥珀酸单酯，DSPE-PEGn-pep，ICD诱导剂和腺苷通路阻断剂。

2.如权利要求1所述的pH敏感脂质体，其特征在于，所述ICD诱导剂包括强心苷、奥沙利铂、蒽环类药物、米托蒽醌、阿霉素、环磷酰胺和光热剂；

或者，所述腺苷通路阻断剂包括CD39抑制剂、CD73抑制剂、A2aR受体抑制剂在内的小分子抑制剂和抗体药物；

优选地，所述CD39抑制剂选择POM-1。

3.如权利要求1所述的pH敏感脂质体，其特征在于，(2,3-二油酰基-丙基)-三甲基铵-氯盐：二油酰磷脂酰胆碱：胆固醇琥珀酸单酯：DSPE-PEGn-pep的摩尔比为(2～5)：(0.5～1.5)：(0.5～1.5)：(0.1～0.3)；

ICD诱导剂与(2,3-二油酰基-丙基)-三甲基铵-氯盐、二油酰磷脂酰胆碱和胆固醇琥珀酸单酯的三者总质量的比为(5～12)：100；

腺苷通路阻断剂与ICD诱导剂的质量比为(0.5～2)：(0.5～3)，优选为1:1。

4.如权利要求1所述的pH敏感脂质体，其特征在于，DSPE-PEGn-pep中的n＝2000～5000；优选地，n＝2000,3500,5000，进一步优选地，n＝2000。

5.一种权利要求1所述的pH敏感脂质体的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：

(1)合成ICD诱导剂前药；

(2)制备多肽-PEG-N-二硬脂酰磷脂酰乙酰胺DSPE-PEGn-pep：在PLGLAG水溶液中加入EDC和NHS，室温活化羧基，将氨基-PEG-N-二硬脂酰磷脂酰乙酰胺DSPE-PEG_n-NH₂溶解于DMF中，缓慢加入其中，搅拌反应后透析纯化，冷冻干燥得到最终产物DSPE-PEGn-pep；

(3)制备ICD诱导剂脂质体：将(2,3-二油酰基-丙基)-三甲基铵-氯盐、二油酰磷脂酰胆碱、胆固醇琥珀酸单酯、ICD诱导剂前药溶解于适量氯仿，真空旋蒸后形成脂质薄膜，与葡萄糖溶液水合搅拌，然后强制挤出得到ICD诱导剂脂质体混悬液；

(4)制备腺苷通路阻断剂/ICD诱导剂脂质体：将步骤(3)得到的ICD诱导剂脂质体混悬液缓慢滴加到腺苷通路阻断剂溶液中，室温搅拌，即得腺苷通路阻断剂/ICD诱导剂脂质体混悬液；

(5)制备POL：

在腺苷通路阻断剂/ICD诱导剂脂质体混悬液中加入DSPE-PEGn-pep，搅拌、超滤、离心即得。

6.如权利要求5所述的pH敏感脂质体的制备方法，其特征在于，步骤(3)中与葡萄糖溶液水合的温度为30-50℃，优选40℃；

优选地，步骤(3)中所述葡萄糖溶液的浓度为4-6％；优选地，搅拌时间为30-120min，优选60min；优选地，强制挤出采用220nm的聚碳酸酯膜过滤器进行。

7.如权利要求5所述的pH敏感脂质体的制备方法，其特征在于，步骤(4)中搅拌为室温下800-200rpm搅拌10-12min；

或者，步骤(5)中腺苷通路阻断剂/ICD诱导剂脂质体混悬液与DSPE-PEG2000-pep的摩尔比为100：1；

或者，步骤(5)中40-50℃搅拌反应4-5h。

8.如权利要求5所述的pH敏感脂质体的制备方法，其特征在于，当ICD诱导剂选择奥沙利铂时，奥沙利铂前药OXA-C的制备方法为：

将奥沙利铂溶解在DMF中，加入H₂O₂溶液，并在室温下反应得到OXA-OH；

将OXA-OH重新溶解于DMF中，加入十六烷基异氰酸酯，黑暗条件下反应24-72h；加入饱和食盐水出现白色沉淀混合物，使用乙酸乙酯萃取后，真空浓缩混合物，真空干燥；通过凝胶柱层层析的方法获得最终白色粉末OXA-C。