[发明专利]一种稀土纳米探针的抗体修饰方法

说明书

本发明实施例公开了一种稀土纳米探针的抗体修饰方法，包括：利用高温热分解方法制备均匀的稀土发光纳米探针，并用盐酸去除稀土发光纳米探针在制备过程中混杂的配体，将稀土发光纳米探针与含有巯基的配体混合，使稀土发光纳米探针表面包含巯基基团；将蛋白A分子与含有马来酰亚胺基和羧基琥珀酰亚胺基的有机物进行混合，使蛋白A分子表面引入马来酰亚胺基；将包含巯基的稀土发光纳米探针与引入马来酰亚胺基的蛋白A分子混合，使稀土发光纳米探针与蛋白A相连，并于抗体分子混合，得到抗体修饰的稀土发光纳米探针。本发明可以建立高灵敏、快速、便捷、高特异性的检测方法，有望应用于靶向成像、疾病诊断、卫生防疫、食品检测等众多领域。

技术领域

本发明实施例涉及化学技术领域，尤其是一种稀土纳米探针的抗体修饰方法。

背景技术

稀土纳米探针具备可近红外激发、发光谱带窄、发光稳定、斯托克斯位移大、荧光背景低、可CT/MRI造影成像等诸多优点，目前利用稀土纳米发光探针已被应用于检测分析领域，特别是基于稀土上转换纳米发光探针的免疫检测研究，通过稀土纳米粒子表面连接抗体实现免疫检测、靶向细胞等应用。其基本原理是抗体修饰的稀土纳米发光探针作为标记物，通过抗原与抗体特异性结合，抗体捕获抗原，实现稀土纳米探针的靶向检测或成像。但是对于某些含量较低的样本，当稀土纳米探针捕获能力弱的情况下，将难于用检测或成像，灵敏度低，特异性差。针对稀土纳米发光探针表面抗体的修饰技术进行改进，将极大提高免疫检测的特异性。

经对现有技术的文献检索发现利用稀土纳米探针表面的氨基或羧基配体基团直接与抗体进行修饰，而这种直接修饰的方法通常会导致抗体免疫检测活性的FAB端连接到稀土纳米探针的表面，从而丧失和抗原的特异性连接活性。蛋白A(Recombinant ProteinA)源自葡萄球菌细胞壁的组成成分，能特异性的结合免疫分子的Fc区域，具有和抗体的Fc端特异性连接的能力，因此，将蛋白A分子修饰到稀土纳米探针表面来连接抗体，发展稀土纳米探针的表面抗体修饰技术将极大改善稀土纳米探针免疫检测或靶向成像的特异性识别能力。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明创造的实施例提供一种稀土纳米探针的抗体修饰方法，包括：

利用高温热分解方法制备均匀的稀土发光纳米探针，并用盐酸去除稀土发光纳米探针在制备过程中混杂的配体，将稀土发光纳米探针与含有巯基的配体混合，使稀土发光纳米探针表面包含巯基基团；

将蛋白A分子与含有马来酰亚胺基和羧基琥珀酰亚胺基的有机物进行混合，使蛋白A分子表面引入马来酰亚胺基；

将包含巯基的稀土发光纳米探针与引入马来酰亚胺基的蛋白A分子混合，使稀土发光纳米探针与蛋白A相连，并于抗体分子混合，得到抗体修饰的稀土发光纳米探针。

进一步地，还包括：

将稀土氯化物与十八烯、油酸在氩气环境下加热至100-200℃，维持至少30分钟，使稀土氯化物完全溶解得到淡黄色的澄清溶液，冷却至室温；

加入甲醇加热至70-90℃，保持至少30分钟，使甲醇完全蒸发，继续加热至280-320℃，保持至少90分钟后冷却至室温，利用乙醇离心纯化，取离心物分散于正己烷中得到稀土发光纳米探针。

进一步地，取正己烷混合物并加入盐酸，超声至少3小时去除混杂的配体，离心至少20分钟，取离心物分散于水中。

进一步地，将蛋白A溶液和SMCC溶液按照1:5-7的比例混合，室温下搅拌至少1小时，离心，将离心物分散于缓冲液中。

进一步地，蛋白A溶液为蛋白A与pH为7.5的HEPES和NaCl的混合液，SMCC溶液为SMCC与pH为7.5的HEPES和NaCl的混合液。

进一步地，稀土发光纳米探针为包含镧、铈、镨、钕、钷、钐、铕、钆、铽、镝、钬、铒、铥、镱、镥、钇或钪中至少一种元素。