[发明专利]DNA网络水凝胶、制备方法及其组合物

说明书

本发明公开了DNA网络水凝胶、制备方法及其组合物，网络水凝胶，包括网络水凝胶载体，具有DNA链所形成的网络结构；HhaI@TGMS纳米颗粒，负载于所述网络水凝胶载体。本发明赋予了DNA网络降解及T细胞释放的可控性，从而实现了对细胞表面的免疫检查点的阻断及肿瘤T淋巴细胞的响应性释放，成功应用于肿瘤免疫治疗，在黑色素瘤小鼠模型中发挥了显著的免疫疗效。

在先申请日：2021/11/4

在先申请号：2021113016722

技术领域

本发明是关于生物制药技术，特别是关于一种DNA网络水凝胶、制备方法及其组合物。

背景技术

肿瘤免疫疗法是一种新兴的癌症治疗方法，它旨在激活改善患者自身的免疫系统攻击肿瘤细胞。与传统的手术疗法、化学疗法相比，具有更强的系统性以及更低的全身毒性。近年来肿瘤免疫治疗取得了重大突破，但实体瘤存在肿瘤免疫抑制微环境，大大降低了现有免疫治疗技术的有效性。例如，肿瘤细胞产生的程序性死亡配体-1(PD-L1)能够通过与T细胞上的PD-1受体结合，抑制T细胞活化，从而降低免疫疗效。近年来研究者们正在不断探索各种打破肿瘤免疫抑制微环境的方法，以提高现有免疫治疗技术的有效性。目前开发的各种大分子药物，如抗PD-L1抗体等，不仅存在费用较高的问题，并且可能会引起自身免疫性炎症等副作用。

公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

发明内容

本发明的目的在于提供一种DNA网络水凝胶、制备方法及其组合物，旨在使DNA网络水凝胶分离肿瘤T淋巴细胞，对其表面的免疫检查点进行封锁，并通过酶响应释放T淋巴细胞，提高肿瘤免疫治疗效果。

说明，在本发明中，技术术语某一组分终浓度是指该组分所在的体系完成最终配制时所体现的浓度，比如RCA产物一中NaCl的终浓度，即为RCA产物一完成品中NaCl的浓度。

为实现上述目的，本发明的实施例提供了DNA网络水凝胶，包括网络水凝胶载体，具有DNA链所形成的网络结构；HhaI@TGMS纳米颗粒，负载于所述网络水凝胶载体。

在本发明的一个或多个实施方式中，网络水凝胶载体至少由RCA产物一、RCA产物二共混后形成，所述RCA产物一、RCA产物二共混的体积比为1：(1-5)，其中，所述RCA产物一其组成至少包括，以每100微升计：(5×10-3～1×10-2)nmol的环状DNA模板一、(3～5)U的phi29DNA聚合酶、终浓度为1×phi29DNA聚合酶缓冲液、终浓度为(0.1～0.4)微克/微升的BSA、(0.05～0.1)nmol的dNTPs、终浓度(60～80)mmol/L的NaCl；所述RCA产物二其组成至少包括，以每100微升计：(5×10-3～1×10-2)nmol的环状DNA模板二，(3～5)U的phi29DNA聚合酶，终浓度为1×phi29DNA聚合酶缓冲液，终浓度为(0.1～0.4)微克/微升的BSA，(0.05～0.1)nmol的dNTPs，终浓度(60～80)mmol/L的NaCl。

本发明的“1×”表示1倍量，是以市售产品按照说明进行补齐稀释后获得，下同。

在本发明的一个或多个实施方式中，环状DNA模板一为由具有末端缺口的环状DNA-1与T4DNA连接酶反应获得，所述环状DNA-1为经5’端磷酸化修饰的ssDNA-1和引物一反应获得，所述ssDNA-1的碱基数为95～130，所述引物一的碱基数为20～37，并且所述ssDNA-1的5’端和3’端分别与引物一的3’端和5’端互补配对。