[发明专利]利用TPCK胰酶提高SARS-CoV-2病毒细胞培养滴度的方法在审
| 申请号： | 202111413930.6 | 申请日： | 2021-11-25 |
| 公开（公告）号： | CN114107223A | 公开（公告）日： | 2022-03-01 |
| 发明（设计）人： | 李翔;余晓;方斌;刘琳琳;徐军强;江永忠 | 申请（专利权）人： | 湖北省疾病预防控制中心（湖北省预防医学科学院） |
| 主分类号： | C12N7/00 | 分类号： | C12N7/00;C12N5/09;C12N5/071 |
| 代理公司： | 湖北武汉永嘉专利代理有限公司 42102 | 代理人： | 张秋燕 |
| 地址： | 430079 湖北*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 利用 tpck 提高 sars cov 病毒 细胞培养 方法 | ||
1.利用TPCK胰酶提高SARS-CoV-2病毒细胞培养滴度的方法，其特征在于将SARS-CoV-2病毒接种到细胞中，然后以含有TPCK胰酶的维持培养基进行培养，从而扩增SARS-CoV-2病毒来提高培养滴度。
2.根据权利要求1所述的利用TPCK胰酶提高SARS-CoV-2病毒细胞培养滴度的方法，其特征在于所述维持培养基中TPCK胰酶的含量在0～16μg/mL，且不为0。
3.根据权利要求2所述的利用TPCK胰酶提高SARS-CoV-2病毒细胞培养滴度的方法，其特征在于所述维持培养基中TPCK胰酶的含量在0～4μg/mL，且不为0。
4.根据权利要求1所述的利用TPCK胰酶提高SARS-CoV-2病毒细胞培养滴度的方法，其特征在于维持培养基由DMEM培养液、BSA、青-链霉素和TPCK胰酶。
5.根据权利要求1所述的利用TPCK胰酶提高SARS-CoV-2病毒细胞培养滴度的方法，其特征在于接种细胞为人肝癌细胞和非洲绿猴肾细胞。
6.根据权利要求1所述的利用TPCK胰酶提高SARS-CoV-2病毒细胞培养滴度的方法，其特征在于接种细胞为初始细胞传代浓度为3×104个/mL～5×105个/mL的人肝癌细胞或非洲绿猴肾细胞，预先培养24～48小时后，接种SARS-CoV-2病毒。
7.根据权利要求1所述的利用TPCK胰酶提高SARS-CoV-2病毒细胞培养滴度的方法，其特征在于接种的SARS-CoV-2病毒与接种细胞的数量比值在0.01～100之间。
8.根据权利要求1所述的利用TPCK胰酶提高SARS-CoV-2病毒细胞培养滴度的方法，其特征在于SARS-CoV-2病毒接种到细胞中1～2小时后，以含有TPCK胰酶的维持培养基进行培养1～3天。
9.根据权利要求8所述的利用TPCK胰酶提高SARS-CoV-2病毒细胞培养滴度的方法，其特征在于培养时间为24～72小时。
10.根据权利要求1所述的利用TPCK胰酶提高SARS-CoV-2病毒细胞培养滴度的方法，其特征在于采用初始细胞传代浓度为3×104个/mL～5×105个/mL的人肝癌细胞或非洲绿猴肾细胞，培养24～48小时后，接种SARS-CoV-2病毒，接种1-2小时后，用无菌洗液洗涤细胞，然后再以含有0～4μg/mL TPCK胰酶的维持培养基进行培养1-3天，从而扩增SARS-CoV-2病毒来提高培养滴度。
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