[发明专利]一种KL-6测定试剂盒及其制备与检测方法

权利要求书

1. 一种KL-6测定试剂盒，其特征在于，包括样本预处理试剂和胶乳试剂；所述样本预处理试剂包括：pH 7.3的磷酸盐缓冲液10mmol/L，甘油5g/L，叠氮钠1g/L，PEG 6000 10g/L；所述胶乳试剂包括：pH 7.3的甘氨酸缓冲液50mmol/L，BSA 0.5~2g/L，Proclin300 1g/L，抗人KL-6抗体混合乳胶颗粒30mg/L；其中，所述抗人KL-6抗体混合乳胶颗粒中的乳胶颗粒采用粒径分别为150nm、180nm的两种不同粒径的乳胶颗粒，抗人KL-6抗体采用鼠抗人KL-6单克隆抗体；

所述抗人KL-6抗体混合乳胶颗粒的具体制备方法如下：

①取粒径为150nm的胶乳微球1mL与粒径为180nm的胶乳微球1mL进行混合，得混合微球；接着，再将缓冲液A与混合微球按体积比1：3进行混合；其中，缓冲液A采用80mmol/L硼酸缓冲液，pH 6；

②加入0.6mL活化剂，混匀，并置于恒温摇床中反应25min，温度37°C；其中，活化剂包括：NHS 25mg/mL，EDC 9.0mg/mL，现配现用；

③加入缓冲液B，调整胶乳溶液的pH值至7.2；其中，缓冲液B采用80mmol/L硼酸钠缓冲液；

④加入2mg抗人KL-6抗体，混匀，并置于恒温摇床中反应2.5h，温度37°C；

⑤加入1.5mL封闭液，混匀，并置于恒温摇床中反应1.5h，温度37°C；其中，封闭液包括：BSA 10g/L，procline-300 1ml/L；

⑥反应完成后离心，离心转速16000rpm，离心时间40 min；

⑦离心完成后，去除上清液，即得目标所需的抗人KL-6抗体混合乳胶颗粒。

2.一种如权利要求1所述的KL-6测定试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）配制样本预处理试剂：

按照样本预处理试剂的组分含量，将各组分于同一容器中混合，混合均匀后，制得样本预处理试剂；

（2）制备抗人KL-6抗体混合乳胶颗粒：

①取粒径为150nm的胶乳微球1mL与粒径为180nm的胶乳微球1mL进行混合，得混合微球；接着，再将缓冲液A与混合微球按体积比1：3进行混合；其中，缓冲液A采用80mmol/L硼酸缓冲液，pH 6；

②加入0.6mL的活化剂，混匀，并置于恒温摇床中反应25min，温度37°C；其中，活化剂包括：NHS 25mg/mL，EDC 9.0mg/mL；

③加入缓冲液B，调整胶乳溶液的pH值至7.2；其中，缓冲液B采用80mmol/L硼酸钠缓冲液；

④加入2mg抗人KL-6抗体，混匀，并置于恒温摇床中反应2.5h，温度37°C；

⑤加入1.5mL封闭液，混匀，并置于恒温摇床中反应1.5h，温度37°C；其中，封闭液包括：BSA 10g/L，procline-300 1ml/L；

⑥反应完成后离心，离心转速16000rpm，离心时间40min；

⑦离心完成后，去除上清液，即得目标所需的抗人KL-6抗体混合乳胶颗粒；

（3）配制胶乳试剂：

①按照胶乳试剂的组分含量，将甘氨酸缓冲液、BSA与Proclin300混合制成微球稀释液；

②用稀释液重悬步骤（2）制得的抗人KL-6抗体混合乳胶颗粒，重悬过程中使用细胞破碎仪辅助重悬，最终制得获得的混合液即为目标所需的胶乳试剂。