[发明专利]一种Aureobasidin A发酵液的纯化方法

说明书

本发明具体涉及一种Aureobasidin A发酵液的纯化方法。本发明提供的分离纯化技术工艺路线降低生产成本更具备产业化的可能同时能稳定获得高质量产品。

技术领域

本发明涉及微生物制药技术领域，具体涉及一种Aureobasidin A发酵液的纯化方法。特别是适用于Aureobasidin A高产菌株CGMCC NO.20887发酵液的纯化。

背景技术

巴西芬净(Aureobasidin A，AbA)是一种由9个氨基酸分子组成的环脂肽类抗生素，最早在1991年由日本Kazutoh Takesako团队从黑酵母Aureobasidiumpullulans的培养液中分离获得。巴西芬净具有很强的抗真菌能力，对其敏感的真菌种类包括：出牙酵母(Saccharomycescerevisiae)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomycespombe)、光滑念珠菌(Candidaglabrata)、构巢曲霉(Aspergillusnidulans)和黑曲霉(A.niger.)。其作用机制是，巴西芬净抑制了真菌生长所依赖的肌醇磷酰胺(inositolphosphorylceramide，IPC)合成酶的活性，干扰鞘脂合成，从而进一步杀死菌株。并且，巴西芬净不会破坏DNA，RNA和蛋白质的合成。

分离纯化Aureobasidin A最早是由Kazutoh Tkaesako等于1991年在《TheJournal Of Antibiotics》发表的一篇名为《AUREOBASIDINS,NEW ANTIFUNGALANTIBIOTICS,TAXONOMY,FERMENTATION,ISOLATION,AND PROPERTIES》的文献中介绍了Aureobasidin A的发酵，纯化及其相关性质。其纯化方法主要包括：离心分离得到菌渣，乙醇浸提，浓缩后乙酸乙酯萃取，硅胶层析及液相制备分离得到各个组分，但是该方法不仅采用离心分离导致生产效率较低、增加生产成本，而且收率偏低。

Ahmed Abdel-Lateff等于2009年在《Natural Product Communications》发表了一篇名为《Aureobasidin,New Antifouling Metabolite from Marine-Derived FungusAureobasidium sp.》的文献介绍了题述菌株所产的一系列Aureobasidin化合物的性质及鉴定，也简单提到了他们所使用的分离纯化方法，即：离心分离得到菌渣，乙酸乙酯浸提，硅胶层析及半制备分离得到各个组分。但是该方法并不能稳定的获得高质量的成品。

发明内容

为克服现有技术的不足，本发明提供一种Aureobasidin A的纯化方法。具体地，上述方法包括如下步骤：

(1)溶剂浸提

(2)硅胶洗脱

(3)高压制备

(4)粗品结晶

具体的，上述步骤(1)包括：取产Aureobasidin A菌种发酵的得到的发酵液，通过过滤装置固液分离得到湿菌渣，烘干后得干菌渣。使用有机溶剂浸提所述的干菌渣，将所得的浸提液在一定温度下，减压真空浓缩至不再滴出液体，得浓缩液。

根据本发明的实施例，上述Aureobasidin A发酵液生产菌株为菌株CGMCCNO.20887。

根据本发明的实施例，步骤(1)中的烘干温度为30～60℃。

根据本发明的实施例，步骤(1)中浸提使用的有机溶剂选自氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、己烷，优选二氯甲烷、乙酸乙酯，更优选乙酸乙酯。

根据本发明的实施例，步骤(1)中减压真空浓缩的温度为20℃～50℃，优选30℃～50℃。