[发明专利]一种Aureobasidin A发酵液的纯化方法

权利要求书

1.一种Aureobasidin A的纯化方法，其包括如下步骤：

(1)溶剂浸提：对由产Aureobasidin A菌种发酵得到的发酵液过滤得到湿菌渣，将所述湿菌渣使用有机溶剂浸提后，减压真空浓缩至不再滴出液体，得浓缩液；

(2)硅胶洗脱：将步骤(1)的浓缩液上样于硅胶柱，以流动相洗脱至结束，合并组分后经浓缩得到干组分；

(3)高压制备：使用高压液相制备色谱仪进行分离，且经过浓缩得Aureobasidin A粗品；

(4)粗品结晶：对Aureobasidin A粗品进行溶解、析出、干燥得到Aureobasidin A成品。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)包括：取产Aureobasidin A菌种发酵得到的发酵液，通过过滤装置固液分离得到湿菌渣，烘干后得干菌渣；使用有机溶剂浸提所述的干菌渣，将所得的浸提液在一定温度下，减压真空浓缩至不再滴出液体，得浓缩液。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，浸提使用的有机溶剂选自氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、己烷，优选二氯甲烷、乙酸乙酯，更优选乙酸乙酯；减压真空浓缩的温度为20℃～50℃，优选30℃～50℃。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)包括：将步骤(1)所得的浓缩液用正己烷混匀上样于硅胶柱，上样结束后，以流动相洗脱至结束样单位低于10μg/mL，合并组分后浓缩至干。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的流动相为正己烷：异丙醇，其体积比选自3:1～6:1，优选3:1～5:1。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)包括：使用高压液相制备色谱仪进行分离，将步骤(2)获得的干组分上柱后再以流动相洗脱，根据液相结果合并组分，即得Aureobasidin A粗品液；将所述的Aureobasidin A粗品液浓缩至白色固体析出，加入乙酸乙酯搅拌后静置分液，干燥脱水后过滤，取滤液；将上述滤液浓缩至干，即得AureobasidinA粗品。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，洗脱使用的流动相为乙腈：水，其体积比选自5:5、6:4、7:3、8:2，优选7:3、8:2。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)包括：将步骤(3)得到的Aureobasidin A粗品加入乙酸乙酯溶解配制成结晶前液，缓慢滴加正己烷，析出晶体后过滤得到结晶湿品，将所述结晶湿品干燥后即得Aureobasidin A成品。

9.如权利要求1～8之一所述的方法，其特征在于，所得的Aureobasidin A成品总收率在49.5％以上，纯度在98.3％以上。