[发明专利]衔接体、复合物、单链分子、试剂盒、方法和应用

说明书

本申请公开了一种用于表征生物分子的衔接体、复合物、单链分子、试剂盒、方法和应用。该衔接体包括主体链和连接链，主体链用于与待测生物分子和多核苷酸结合蛋白结合；连接链包括连接区域和侧链区域，连接区域与主体链连接，侧链区域用于与外部连接物连接，侧链区域与多核苷酸结合蛋白的结合能力弱于主体链与多核苷酸结合蛋白的结合能力，或侧链区域不结合多核苷酸结合蛋白。采用本申请提供的衔接体，其侧链区域与多核苷酸结合蛋白的亲和力较弱，可避免或减小侧链区域结合多核苷酸结合蛋白。

技术领域

本申请涉及纳米孔测序技术，具体涉及一种用于表征生物分子的衔接体、核酸蛋白复合物、单链分子、表征生物分子的方法、试剂盒和应用。

背景技术

在纳米孔测序中，需要将待测生物分子与测序接头(或衔接体)连接，通过测序接头或与测序接头相连的测序结构引导待测生物分子移动经过纳米孔。一般测序接头中设置有一段单链的DNA序列与纳米孔附近分布的系链结合，使得待测生物分子可以靶向至纳米孔附近，该段单链DNA序列称为侧链。

在测序接头的制备过程中，用于协助待测生物分子完成表征的多核苷酸结合蛋白需要与测序接头的指定区域结合，同时该多核苷酸结合蛋白也可能会结合到侧链上，从而影响测序接头与系链连接。现有技术中可以通过氯化钾和三磷酸腺苷溶液，使结合在侧链上的多核苷酸结合蛋白部分脱落下来，再使用该测序接头进行测序，但是通过氯化钾和三磷酸腺苷溶液处理会增加制备时间，降低检测效率。

发明内容

本申请实施例的目的是提供一种用于表征生物分子的衔接体、核酸蛋白复合物、单链分子、表征生物分子的方法、试剂盒和应用，该侧链区域与多核苷酸结合蛋白的亲和力较弱，避免了侧链区域结合多核苷酸结合蛋白，从而提高多核苷酸结合蛋白与主体链的结合率，提高表征生物分子的效率。

本申请的技术方案如下：

第一方面，提供了一种衔接体，该衔接体包括主体链和连接链，主体链用于与待测生物分子和多核苷酸结合蛋白结合；连接链包括连接区域和侧链区域，连接区域与主体链连接，侧链区域用于与外部连接物连接，侧链区域与多核苷酸结合蛋白的结合能力弱于主体链与多核苷酸结合蛋白的结合能力，或侧链区域不结合多核苷酸结合蛋白。

第二方面，本申请实施例提供了一种核酸蛋白复合物，该核酸蛋白复合物包括根据第一方面所述的衔接体和多核苷酸结合蛋白，多核苷酸结合蛋白与主体链结合。

第三方面，本申请实施例提供了一种单链分子，包括根据第一方面所述的连接链。

第四方面，本申请实施例提供了一种表征生物分子的方法，包括：

(a)将多核苷酸结合蛋白、待测生物分子与根据第一方面所述的衔接体结合，形成第一复合物；

(b)将第一复合物与设有外部连接物的跨膜纳米孔或跨膜纳米孔所在的分子膜接触；

(c)使待测生物分子穿过并相对于跨膜纳米孔移动，获取一个或多个测量值，其中测量值代表待测生物分子的一个或多个特征，且由此表征待测生物分子。

第五方面，本申请实施例提供了一种试剂盒，包括根据第一方面所述的衔接体、根据第二方面所述的核酸蛋白复合物、或根据第三方面所述的单链分子。

第六方面，本申请实施例提供了一种根据第一方面所述的衔接体、或根据第二方面所述的核酸蛋白复合物、或根据第三方面所述的单链分子、或根据第四方面所述的核酸蛋白复合物通过跨膜纳米孔的控制方法、或根据第五方面所述的试剂盒在表征生物分子上的应用。

本申请的实施例提供的技术方案至少带来以下有益效果：

本申请实施例提供的衔接体中，由于侧链区域与多核苷酸结合蛋白的亲和力较弱，避免了衔接体侧链区域结合多核苷酸结合蛋白；在不改变现有外部连接物序列或结构的基础上，侧链区域还可以与外部连接物连接，使得衔接体可富集在具有跨膜纳米孔的分子膜附近。