[发明专利]一种快速蛋白免疫印迹系统方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，且公开了一种快速蛋白免疫印迹系统方法，包括以下步骤：S1、获取蛋白质样品；S2、制备梯度预制凝胶，并将蛋白质样品放入到梯度预制凝胶中进行电泳；S3、电泳结束后，将胶条切割成合适的大小，并用蛋白转膜液进行平衡；S4、将预先裁剪好与胶条大小相同的滤纸和NC膜进入到蛋白转膜液中；本发明利用梯度预制凝胶替代传统实验中的聚丙烯酰胺凝胶，在进行电泳的过程中，不需要进行低压浓缩，只需要外加一个恒压电场进行蛋白的分离即可，并且梯度预制凝胶适应使5‑500kDa蛋白，不需要根据不同蛋白配置不同的凝胶，同时在转膜的过程中，在蛋白转膜液中增加了SDS表面活性剂，可以加快蛋白从凝胶中的剥离速度。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体为一种快速蛋白免疫印迹系统方法。

背景技术

免疫印迹法是一种将高分辨率凝胶电泳和免疫化学分析技术相结合的杂交技术。免疫印迹法具有分析容量大、敏感度高、特异性强等优点，是检测蛋白质特性、表达与分布的一种最常用的方法，如组织抗原的定性定量检测、多肽分子的质量测定及病毒的抗体或抗原检测等，传统的蛋白免疫印迹实验成熟，但是消耗的时间较长，不利于后续工作的快速展开。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种快速蛋白免疫印迹系统方法，解决了上述背景技术中所存在的问题。

(二)技术方案

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种快速蛋白免疫印迹系统方法，包括以下步骤：

S1、获取蛋白质样品；

S2、制备梯度预制凝胶，并将蛋白质样品放入到梯度预制凝胶中进行电泳；

S3、电泳结束后，将胶条切割成合适的大小，并用蛋白转膜液进行平衡；

S4、将预先裁剪好与胶条大小相同的滤纸和NC膜进入到蛋白转膜液中；

S5、将转膜装置从下到上按阳极碳板、24层滤纸、NC膜、凝胶、24层滤纸、阴极碳板的顺序放好，然后接通电源开始转膜；

S6、转膜结束后，断开电源并将膜取出，然后将膜用SNAP i.d.^②2.0蛋白检测系统，采用真空负压加速蛋白结合，加快孵育时间；

S7、孵育结束后，在膜上加入显色液，避光显色至出现条带时放入双蒸水终止反应。

优选的，所述步骤S1中的蛋白质样品的获得过程为：诱导细菌表达后，通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞，真核细胞加匀浆缓冲液，机械或超声波室温匀浆0.5-1min，然后在4℃的人温度下，13000r离心15min，取上清液即可得到蛋白质样品。

优选的，所述步骤S2中，在制备梯度预制凝胶的时候，检测凝胶中各个离子以及各个离子的摩尔浓度，并根据凝胶中各个离子的价数z以及各个离子的摩尔浓度m计算离子的强度I，并保持离子强度I在0.02-0.2之间，其中：

n为凝胶中的各种离子。

优选的，所述方法中的蛋白转膜液包括甘氨酸2.9g、Tris 5.8g、SDS0.37g、SDS表面活性剂1.3g、甲醇200ml，加ddH₂O定容至1000ml。

优选的，所述步骤S5中，滤纸、凝胶、NC膜精准对齐，并在在按照顺序摆放阳极碳板、滤纸、NC膜、凝胶和阴极碳板的时候，每一步都要去除气泡，并且在上一层结构上压500g重物，然后将碳板上多余的液体吸干。

优选的，所述方法中的显色液包括DAB 6.0mg、0.01m PBS 10ml、硫酸镍铵0.1ml、H₂O₂1.0μl。