[发明专利]一种快速蛋白免疫印迹系统方法

权利要求书

1.一种快速蛋白免疫印迹系统方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1、获取蛋白质样品；

S2、制备梯度预制凝胶，并将蛋白质样品放入到梯度预制凝胶中进行电泳；

S3、电泳结束后，将胶条切割成合适的大小，并用蛋白转膜液进行平衡；

S4、将预先裁剪好与胶条大小相同的滤纸和NC膜进入到蛋白转膜液中；

S5、将转膜装置从下到上按阳极碳板、24层滤纸、NC膜、凝胶、24层滤纸、阴极碳板的顺序放好，然后接通电源开始转膜；

S6、转膜结束后，断开电源并将膜取出，然后将膜用SNAPi.d.^②2.0蛋白检测系统，采用真空负压加速蛋白结合，加快孵育时间；

S7、孵育结束后，在膜上加入显色液，避光显色至出现条带时放入双蒸水终止反应。

2.根据权利要求1所述的一种快速蛋白免疫印迹系统方法，其特征在于：所述步骤S1中的蛋白质样品的获得过程为：诱导细菌表达后，通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞，真核细胞加匀浆缓冲液，机械或超声波室温匀浆0.5-1min，然后在4℃的人温度下，13000r离心15min，取上清液即可得到蛋白质样品。

3.根据权利要求1所述的一种快速蛋白免疫印迹系统方法，其特征在于：所述步骤S2中，在制备梯度预制凝胶的时候，检测凝胶中各个离子以及各个离子的摩尔浓度，并根据凝胶中各个离子的价数z以及各个离子的摩尔浓度m计算离子的强度I，并保持离子强度I在0.02-0.2之间，其中：

n为凝胶中的各种离子。

4.根据权利要求1所述的一种快速蛋白免疫印迹系统方法，其特征在于：所述方法中的蛋白转膜液包括甘氨酸2.9g、Tris5.8g、SDS0.37g、SDS表面活性剂1.3g、甲醇200ml，加ddH₂O定容至1000ml。

5.根据权利要求1所述的一种快速蛋白免疫印迹系统方法，其特征在于：所述步骤S5中，滤纸、凝胶、NC膜精准对齐，并在在按照顺序摆放阳极碳板、滤纸、NC膜、凝胶和阴极碳板的时候，每一步都要去除气泡，并且在上一层结构上压500g重物，然后将碳板上多余的液体吸干。

6.根据权利要求1所述的一种快速蛋白免疫印迹系统方法，其特征在于：所述方法中的显色液包括DAB6.0mg、0.01mPBS10ml、硫酸镍铵0.1ml、H₂O₂1.0μl。

7.根据权利要求1所述的一种快速蛋白免疫印迹系统方法，其特征在于：所述步骤S2在进行电泳的时候，在恒压110V的电压下，持续50min即可。

8.根据权利要求1所述的一种快速蛋白免疫印迹系统方法，其特征在于：所述步骤S6在1h内即可完成。