[发明专利]一种海藻糖和葡萄糖酸联产的方法

权利要求书

1. 一种海藻糖和葡萄糖酸联产的方法，其特征在于：在海藻糖合酶催化麦芽糖制备海藻糖的过程中添加产葡萄糖酸黑曲霉AnM1菌体，在海藻糖合成反应结束后回收菌体，在反应液中添加糖化酶和黑曲霉AnM1菌体；将反应液中剩余麦芽糖水解成葡萄糖并氧化成葡萄糖酸，获得含海藻糖和葡萄糖酸的反应液；其中黑曲霉的保藏编号为CCTCC M 20211310。

2. 根据权利要求1所述的一种海藻糖和葡萄糖酸联产的方法，其特征在于：所述海藻糖合酶来源于谷氨酸棒杆菌（Corynebacterium glutamicum）ATCC13032，其编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO. 1所示。

3.根据权利要求1所述的一种海藻糖和葡萄糖酸联产的方法，其特征在于：所述海藻糖合酶催化麦芽糖制备海藻糖的过程，所述海藻糖合酶由重组谷氨酸棒杆菌细胞破碎液提供，或由曲拉通X-100处理重组谷氨酸棒杆菌获得的透性化细胞提供。

4. 根据权利要求3所述的一种海藻糖和葡萄糖酸联产的方法，其特征在于：曲拉通X-100处理重组谷氨酸棒杆菌获得透性化细胞是在重组谷氨酸棒杆菌培养并诱导合成海藻糖合酶之后于培养液中添加10~20 g/l曲拉通X-100在30 ^oC、180 r/min条件下处理2 h，离心收集菌体并利用生理盐水洗涤一次，获得透性化细胞。

5. 根据权利要求1所述的一种海藻糖和葡萄糖酸联产的方法，其特征在于：所述在海藻糖合酶催化麦芽糖制备海藻糖的过程中添加产葡萄糖酸黑曲霉AnM1菌体，其中黑曲霉AnM1菌体添加量为湿重菌体1g/l，制备海藻糖的过程反应温度为30 ^oC，摇床转速160 r/min，通过添加碳酸钙维持反应体系pH。

6.根据权利要求1所述的一种海藻糖和葡萄糖酸联产的方法，其特征在于：所述海藻糖合成反应结束的特征为海藻糖合成反应平衡海藻糖浓度增加缓慢，海藻糖合成反应结束后反应液离心收集转化液上清和透性化重组谷氨酸棒杆菌和黑曲霉AnM1菌体，收集的透性化重组谷氨酸棒杆菌和黑曲霉AnM1菌体可重复用于催化麦芽糖制备海藻糖。

7. 根据权利要求1所述的一种海藻糖和葡萄糖酸联产的方法，其特征在于：所述在海藻糖合成反应结束后的反应液中添加糖化酶，所述糖化酶催化转化液上清中剩余的麦芽糖水解成葡萄糖，所述商品化液体糖化酶活力单位为10万U/ml，糖化酶添加量为转化液体积的0.02%，糖化过程温度为50 ^oC，pH为4.0~5.0，当葡萄糖浓度不再增加时结束糖化。

8. 根据权利要求1所述的一种海藻糖和葡萄糖酸联产的方法，其特征在于：所述在海藻糖合成反应结束后的反应液中添加黑曲霉AnM1菌体，所述添加黑曲霉AnM1菌体是在转化液糖化后温度降至37 ^oC，添加碳酸钙40 g/l后进行黑曲霉AnM1菌体的添加，黑曲霉AnM1菌体添加量为湿重菌体5 g/l，反应温度为37 ^oC，摇床转速为220 r/min，反应体系葡萄糖浓度降至0.5~1 g/l时结束反应，反应液离心收集黑曲霉AnM1菌体并获得含海藻糖和葡萄糖酸的上清。

9.根据权利要求8所述的一种海藻糖和葡萄糖酸联产的方法，其特征在于：所述的反应液离心收集黑曲霉AnM1菌体可重复用于葡萄糖氧化产生葡萄糖酸。