[发明专利]一种富集细胞表面介导tau蛋白扩散受体的方法

权利要求书

1.一种富集细胞表面介导tau蛋白扩散受体的方法，其特征在于：

1)在tau蛋白上修饰biotin，获得tau-biotin；

2)将tau-biotin与细胞共孵育，收集细胞进行细胞裂解，然后于裂解的细胞液中加入10-100μlStreptavidin Agarose将目标蛋白富集出来。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：

具体过程为，

1)取50-200μg tau蛋白溶解于100μl水中；

配制终浓度为5-20mmolL^-1EZ-Link^TMSulfo-NHS-LC-biotin水溶液；

取1-5μlEZ-Link^TMSulfo-NHS-LC-biotin水溶液加入到溶解的tau蛋白中，混匀，4-25℃反应1-4小时，加入1-10μl浓度为1molL^-1的碳酸氢铵中和未反应的EZ-Link^TMSulfo-NHS-LC-biotin，得到tau-biotin溶液；

2)于含有细胞的培养液中加入终浓度50-200nmolL^-1tau-biotin孵育细胞1-4小时，孵育结束后，弃上清，用PBS洗细胞；

于1～5x10⁷个细胞中加入1ml细胞裂解液；裂解后，12000-15000g，4℃，20-40分钟离心；离心收集上清，于上清液中加入10-100μlStreptavidin Agarose(链霉亲和素琼脂糖纯化树脂)室温条件下富集，富集时间2-6小时；富集结束后，离心弃上清；加入细胞裂解液洗Streptavidin Agarose；洗完后，向Streptavidin Agarose中加入20-60μl1xloadingbuffer，95℃，5-10分钟，使蛋白变性脱落；离心收集蛋白。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：

所述细胞为神经细胞。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：所述细胞包括小鼠海马神经元细胞、小胶质细胞中的一种或二种。

5.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：

步骤2)中tau-biotin与细胞共孵育后，收集细胞后加入交联剂，孵育10-40分钟，交联剂BSP、PEG5中的一种或二种，细胞中的交联剂浓度为每1x10⁷个细胞交联剂用量1-5mg；然后再次收集细胞，进行细胞裂解，获得裂解的细胞液。