[发明专利]一种酶法转化黄芪甲苷制备环黄芪醇的方法在审
| 申请号： | 202111391795.X | 申请日： | 2021-11-23 |
| 公开（公告）号： | CN113999887A | 公开（公告）日： | 2022-02-01 |
| 发明（设计）人： | 顾正兵;朱年青;陶月红;徐丽丽 | 申请（专利权）人： | 泰州丹鼎生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12P33/20 | 分类号： | C12P33/20;C12N9/42;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 南京禹为知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 32272 | 代理人： | 康伟 |
| 地址： | 225300 江苏省泰州市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 转化 黄芪 制备 方法 | ||
1.一种酶法转化黄芪甲苷制备环黄芪醇的方法，其特征在于：由GH3家族的β-葡萄糖苷酶水解黄芪甲苷母核上C3位的β-D-糖苷键和C6位的β-D-糖苷键。
2.如权利要求1所述的酶法转化黄芪甲苷制备环黄芪醇的方法，其特征在于：所述GH3家族的β-葡萄糖苷酶来源于Dictyoglomus turgidum DSM 6724，其氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示。
3.如权利要求2所述的酶法转化黄芪甲苷制备环黄芪醇的方法，其特征在于：所述GH3家族的β-葡萄糖苷酶由SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列通过重组大肠杆菌表达获得。
4.如权利要求3所述的酶法转化黄芪甲苷制备环黄芪醇的方法，其特征在于：所述GH3家族的β-葡萄糖苷酶以纯化后的β-葡萄糖苷酶添加，体系中酶添加量为10～20U/mL。
5.如权利要求4所述的酶法转化黄芪甲苷制备环黄芪醇的方法，其特征在于：所述纯化后的β-葡萄糖苷酶，将SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列插入表达载体后导入至大肠杆菌，30℃诱导表达，离心收集菌体，超声破碎并离心，上清液为重组β-葡萄糖苷酶粗酶液，将重组β-葡萄糖苷酶粗酶液纯化。
6.如权利要求3所述的酶法转化黄芪甲苷制备环黄芪醇的方法，其特征在于：所述GH3家族的β-葡萄糖苷酶以含有β-葡萄糖苷酶的细胞催化剂添加，体系中细胞催化剂的添加量为10～30g/L。
7.如权利要求6所述的酶法转化黄芪甲苷制备环黄芪醇的方法，其特征在于：所述含有β-葡萄糖苷酶的细胞催化剂，将SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列插入表达载体后导入至大肠杆菌，30℃诱导表达，离心收集菌体，得到含有β-葡萄糖苷酶的细胞催化剂。
8.如权利要求1～7中任一项所述的酶法转化黄芪甲苷制备环黄芪醇的方法，其特征在于：体系中黄芪甲苷的质量浓度为0.5～2g/L。
9.如权利要求1～7中任一项所述的酶法转化黄芪甲苷制备环黄芪醇的方法，其特征在于：体系pH为5.0，反应温度为70～80℃，反应时间为1～24h。
10.如权利要求1～7中任一项所述的酶法转化黄芪甲苷制备环黄芪醇的方法，其特征在于：所述黄芪甲苷以纯化的黄芪甲苷或黄芪甲苷提取浸膏添加；
所述纯化的黄芪甲苷，黄芪甲苷的纯度还不低于90.0％；所述黄芪甲苷提取浸膏，黄芪甲苷的含量不低于2.0％。
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