[发明专利]试剂盒及其制备方法和应用

说明书

本发明公开一种试剂盒及其制备方法和应用，涉及医疗诊断技术领域，试剂盒用于检测组织纤溶酶原激活物‑纤溶酶原激活物抑制剂‑1复合物的含量，试剂盒包括：第一工作液，包括生物素化包被抗体和第一缓冲液，所述生物素化包被抗体由生物素与包被抗体偶联得到；第二工作液，包括包被有链霉亲和素的超顺磁微粒和第二缓冲液；第三工作液，包括标记有酶的标记抗体和第三缓冲液，所述标记有酶的标记抗体由经碳二亚胺和N‑羟基琥珀酰亚胺活化后的酶与标记抗体偶联得到；发光底物以及清洗液。本发明提出的试剂盒，在检测组织纤溶酶原激活物‑纤溶酶原激活物抑制剂‑1复合物的含量时，准确度高、稳定性好。

技术领域

本发明涉及医疗诊断技术领域，特别涉及一种试剂盒及其制备方法和应用。

背景技术

组织型纤溶酶原激活剂抑制剂(PAI-1)是组织纤维溶酶原激活物(t-PA)的生理性抑制剂，二者1:1形成复合物即t-PAI-C后，t-PA激活纤溶酶原的活性被抑制，进而抑制纤维蛋白降解。当凝血活化，纤维蛋白形成后可以激活合成于血管内皮细胞的组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)，活化的t-PA进一步激活纤溶酶原转化为纤溶酶，后者降解纤维蛋白产生纤维蛋白降解产物。血浆中PAI-1浓度为t-PA浓度的5倍，远远高于t-PA，因此可认为释放到血液中的t-PA几乎都与PAI-1形成了复合物。t-PAI-C水平与t-PA浓度及血管内皮损伤程度呈正相关，是评估两者的直接标志物。

t-PAI-C升高主要见于弥散性血管内凝血(DIC)、血管内皮损伤和各种动脉静脉血栓症(深静脉血栓形成、急性心肌梗死等)。有研究显示，t-PAI-C可以作为心肌梗死的风险预测指标。

目前市场上国外国内仅有极少数厂家有此试剂盒且都价格昂贵难于获取，商业化试剂盒少；随着临床推广，组织纤溶酶原激活物-纤溶酶原激活物抑制剂-1复合物(t-PAI-C)商业化测定试剂盒市场需求也在急剧增加。

发明内容

本发明的主要目的是提出一种试剂盒及其制备方法和应用，旨在提供一种准确度高、稳定性好的用于检测组织纤溶酶原激活物-纤溶酶原激活物抑制剂-1复合物的含量的试剂盒。

为实现上述目的，本发明提出一种试剂盒，用于检测组织纤溶酶原激活物-纤溶酶原激活物抑制剂-1复合物的含量，所述试剂盒包括：

第一工作液，包括生物素化包被抗体和第一缓冲液，所述生物素化包被抗体由生物素与包被抗体偶联得到；

第二工作液，包括包被有链霉亲和素的超顺磁微粒和第二缓冲液；

第三工作液，包括标记有酶的标记抗体和第三缓冲液，所述标记有酶的标记抗体由经碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺活化后的酶与标记抗体偶联得到；

发光底物以及清洗液。

可选地，所述酶包括碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶。

可选地，所述第一缓冲液包括磷酸氢二钠、NaCl、BSA、CaCl₂、Triton X-100、Tween-20和甘氨酸。

可选地，所述第二缓冲液包括三羟基氨基甲烷、NaCl、Triton X-100、Proclin300和Tween20。

可选地，所述第三缓冲液还包括吗啉乙磺酸、NaCl、ZnCl₂、MgCl₂、甘氨酸、甘油、BSA、Proclin300和Tween20；和/或，

所述发光底物包括9-(4-氯苯基硫代磷酰氧亚甲基)-10-甲基二氢吖啶二钠盐；和/或，

所述清洗液包括三羟基氨基甲烷、NaCl、Tween-20、Triton X-100和Proclin300。

可选地，所述生物素包括生物素-N-琥珀酰亚胺酯。