[发明专利]试剂盒及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种试剂盒，其特征在于，用于检测组织纤溶酶原激活物-纤溶酶原激活物抑制剂-1复合物的含量，所述试剂盒包括：

第一工作液，包括生物素化包被抗体和第一缓冲液，所述生物素化包被抗体由生物素与包被抗体偶联得到；

第二工作液，包括包被有链霉亲和素的超顺磁微粒和第二缓冲液；

第三工作液，包括标记有酶的标记抗体和第三缓冲液，所述标记有酶的标记抗体由经碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺活化后的酶与标记抗体偶联得到；

发光底物以及清洗液。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述酶包括碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶。

3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第一缓冲液包括磷酸氢二钠、NaCl、BSA、CaCl₂、Triton X-100、Tween-20和甘氨酸。

4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第二缓冲液包括三羟基氨基甲烷、NaCl、Triton X-100、Proclin300和Tween20。

5.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第三缓冲液还包括吗啉乙磺酸、NaCl、ZnCl₂、MgCl₂、甘氨酸、甘油、BSA、Proclin300和Tween20；和/或，

所述发光底物包括9-(4-氯苯基硫代磷酰氧亚甲基)-10-甲基二氢吖啶二钠盐；和/或，

所述清洗液包括三羟基氨基甲烷、NaCl、Tween-20、Triton X-100和Proclin300。

6.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述生物素包括生物素-N-琥珀酰亚胺酯。

7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述生物素包括NHS-LC-Biotin。

8.一种如权利要求1-7任意一项所述的试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

将生物素与包被抗体偶联，去除多余的生物素后，用第一缓冲液稀释，得第一工作液；

取包被有链霉亲和素的超顺磁微粒原液，用第二缓冲液稀释，得第二工作液；

将酶用碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺活化后，与标记抗体偶联0.5～5h，加入酶封闭液封闭5～30min后，纯化得标记有酶的标记抗体，向所述标记有酶的标记抗体中加入第三缓冲液，得第三工作液。

9.如权利要求8所述的试剂盒的制备方法，其特征在于，所述酶封闭液包括盐酸羟胺。

10.一种组织纤溶酶原激活物-纤溶酶原激活物抑制剂-1复合物的含量的检测方法，其特征在于，采用如权利要求1至7任意一项所述的试剂盒，所述组织纤溶酶原激活物-纤溶酶原激活物抑制剂-1复合物的含量的检测方法包括以下步骤：

将待测样本与第一工作液、第三工作液混合均匀，孵育后，得到混合液；

向所述混合液中加入第二工作液，混合均匀，得反应液；

用清洗液清洗所述反应液后，加入发光底物，得待测液；

检测所述待测液的发光强度；

根据发光强度计算组织纤溶酶原激活物-纤溶酶原激活物抑制剂-1复合物的含量。