[发明专利]甲基化检测组合物、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种核酸扩增或检测方法，包括采用寡核苷酸接头延伸靶标分子、和采用捕获寡核苷酸结合靶标分子的步骤，

所述寡核苷酸接头从5’到3’包含第一结合序列和第二结合序列，所述第一结合序列包含与捕获寡核苷酸的3’末端序列至少部分相同的序列，所述第二结合序列与靶标分子互补，

优选地，

所述寡核苷酸接头还包括核酸延伸阻断修饰，

所述核酸延伸阻断修饰位于第二结合序列的3’端，和/或

所述第二结合序列与靶标分子的非5’末端序列互补；优选地，所述第二结合序列与靶标分子的3’末端序列互补，和/或

所述第二结合序列具有核酸类似物修饰；优选地，所述核酸类似物包括选自以下的一种或多种：肽核酸、锁核酸、2'-O，4'-C-甲基化架桥RNA、2'-甲氧基修饰碱基、2'-O-甲基RNA、脱氧尿嘧啶核苷或2'-氟代RNA，和/或

所述靶标分子是3’端和5’端序列明确的靶标分子；优选地，所述靶标分子是位点特异性切割核酸酶的酶切产物，

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述捕获寡核苷酸从5’到3’包括第一通用序列、折叠序列和结合捕获序列，其中，所述折叠序列与靶标分子的5’末端序列至少部分相同，和/或所述结合捕获序列与权利要求1所述的寡核苷酸接头的非3’末端序列至少部分相同，

优选地，

所述结合捕获序列与寡核苷酸接头的第一结合序列至少部分相同，和/或

所述捕获寡核苷酸具有核酸类似物修饰；优选地，所述核酸类似物修饰位于第一通用序列、折叠序列、或结合捕获序列；优选地，所述核酸类似物包括选自以下的一种或多种：肽核酸、锁核酸、2'-O，4'-C-甲基化架桥RNA、2'-甲氧基修饰碱基、2'-O-甲基RNA、脱氧尿嘧啶核苷或2'-氟代RNA，和/或

所述捕获寡核苷酸还包括核酸延伸阻断修饰；优选地，所述核酸延伸阻断修饰位于折叠序列的3’端；优选地，所述核酸延伸阻断修饰位于第二通用序列的5’端；优选地，所述核酸延伸阻断修饰包括选自以下的一种或多种：Spacer、硫代基团、巯基、氨基和尿嘧啶碱基。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)3’端和5’端序列明确的靶标分子与寡核苷酸接头的结合序列互补结合，

(2)靶标分子以寡核苷酸接头为模板延伸，在靶标分子的3’末端添加与寡核苷酸接头互补的序列，获得延伸的靶标分子，

(3)延伸的靶标分子与捕获寡核苷酸的结合捕获序列互补结合，

(4)捕获寡核苷酸以延伸的靶标分子为模板进行延伸反应，在捕获寡核苷酸3’末端添加与延伸的靶标分子互补的序列，获得延伸的捕获寡核苷酸，

(5)延伸的捕获寡核苷酸通过延伸的序列与分子内的折叠序列结合，形成半发夹结构产物；

(6)半发夹结构产物进行延伸反应，在3’末端添加与分子内的第一通用序列互补的核苷酸，形成完整的发夹结构产物，

优选地，

步骤(1)和(2)是：

(1)3’端和5’端序列明确的靶标分子与寡核苷酸接头的第二结合序列互补结合，

(2)靶标分子以寡核苷酸接头为模板延伸，在靶标分子的3’末端添加与寡核苷酸接头的第一结合序列互补的序列，获得延伸的靶标分子。