[发明专利]一种噬菌体裂解酶结合BLI快速检测S.aureus的方法

说明书

本发明提供一种噬菌体裂解酶结合BLI快速检测S.aureus的方法，涉及金黄色葡萄球菌检测技术领域，解决了S.aureus传统检测方法步骤多、操作繁琐、耗时长的问题。包括以下步骤：一是传感器活化，二是裂解酶的固定化，三是将AR2G传感器封闭，四是样品检测及结果判断。本发明操作简单、实时监测、无标记、结果易得；实现样品随到随检，可以在较短的时间完成样品中目标菌的识别检测，根据样品中所含金黄色葡萄球菌浓度的不同，单纯的样品检测时间可以控制在数十秒到十几分钟之内；裂解酶对目标菌可以特异的识别，保证该方法的特异性，排除非目标菌的潜在干扰；通过信号曲线有无峰的出现可以进行死活菌的区分；裂解酶易于获得，方便制备。

技术领域

本发明属于金黄色葡萄球菌检测技术领域，更具体地说，特别涉及一种噬菌体裂解酶结合BLI快速检测S.aureus的方法。

背景技术

金黄色葡萄球菌(S.aureus)是自然界普遍存在的一种革兰氏阳性菌，是一种常见的食源性病原体，对食品加工业和人类健康有潜在危害。此外，它营养需求低，对不利环境有很强的抵抗力，可引起人类和动物传染病。因此，采用快速准确的检测方法检测S.aureus，可以大大减少食物中毒事件的发生。

传统的S.aureus检测方法存在周期长、操作复杂等缺点，难以满足实际需要。随着分子生物学技术的不断发展，多种基于核酸检测的方法被应用于食源性病原体的检测，其中经典的聚合酶链反应(PCR)在快速、高灵敏度和强特异性方面显示出显著优势。然而，除了需要严格的温度控制措施、熟练的技术人员和昂贵的实验室设备外，经典PCR还经常受到外源污染物的干扰从而引起假阳性结果；此外，经典PCR不能区分死活菌。

因此，快速便捷、灵敏准确、易于操作且能够区分死活菌的S.aureus新型检测方法亟需开发。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供一种噬菌体裂解酶LysGH15结合BLI快速检测S.aureus的方法，以解决S.aureus传统检测方法步骤多、操作繁琐、耗时长的问题。

本发明一种噬菌体裂解酶LysGH15结合BLI快速检测S.aureus的方法的目的与功效，由以下具体技术手段所达成：

一种噬菌体裂解酶LysGH15结合BLI快速检测S.aureus的方法，包括以下步骤：

1)、传感器活化：

将AR2G传感器的末端浸入蒸馏水中预湿至少十分钟后，浸入40mM的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和20mM的N-羟基琥珀酰亚胺混合活化试剂中活化150-450秒；

2)、裂解酶的固定化：

将活化后的AR2G传感器浸入用pH4-6的醋酸-醋酸钠缓冲溶液稀释的浓度为12.5-100μg/mL的突变的LysGH15中进行固定化600-900秒；

3)、封闭：

裂解酶固定化后，将AR2G传感器依次浸入1M乙醇胺盐酸盐溶液和1％牛血清白蛋白溶液中封闭150-450秒；

4)、样品检测及结果判断：

将已封闭的AR2G传感器浸入含有0.02％吐温-20的磷酸盐缓冲溶液中平衡150-450秒，然后将其浸入样品中进行S.aureus的检测，实时读取结合信号；

对于定性分析，当结合信号值大于等于仪器的有效信号值0.0075nm即可判定样品中存在S.aureus；

对于定量分析，将结合时间为3分钟、6分钟、9分钟和12分钟的结合信号值y分别代入菌浓度和结合信号间的数学公式(1)、(2)、(3)、(4)，求解所得的浓度即为样品中S.aureus的具体浓度，通过多组数据进行对比，保证检测结果的准确性，提高检测结果的严谨性和实时性，保证最终数据的可信度。