[发明专利]一种噬菌体裂解酶结合BLI快速检测S.aureus的方法

权利要求书

1.一种噬菌体裂解酶结合BLI快速检测S.aureus的方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)、传感器活化：

将AR2G传感器的末端浸入蒸馏水中预湿至少十分钟后，浸入40mM的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和20mM的N-羟基琥珀酰亚胺混合活化试剂中活化150-450秒；

2)、裂解酶的固定化：

将活化后的AR2G传感器浸入用pH4-6的醋酸-醋酸钠缓冲溶液稀释的浓度为12.5-100μg/mL的突变的LysGH15中进行固定化600-900秒；

3)、封闭：

裂解酶固定化后，将AR2G传感器依次浸入1M乙醇胺盐酸盐溶液和1％牛血清白蛋白溶液中封闭150-450秒；

4)、样品检测及结果判断：

将已封闭的AR2G传感器浸入含有0.02％吐温-20的磷酸盐缓冲溶液中平衡150-450秒，然后将其浸入样品中进行S.aureus的检测，实时读取结合信号；

对于定性分析，当结合信号值大于等于仪器的有效信号值0.0075nm即可判定样品中存在S.aureus；

对于定量分析，将结合时间为3分钟、6分钟、9分钟和12分钟的结合信号值y分别代入菌浓度和结合信号间的数学公式(1)、(2)、(3)、(4)，求解所得的浓度即为样品中S.aureus的具体浓度，通过多组数据进行对比，保证最终数据的可信度。

2.如权利要求1所述一种噬菌体裂解酶结合BLI快速检测S.aureus的方法，其特征在于：步骤1)中具体活化时间设置为200-300秒。

3.如权利要求1所述一种噬菌体裂解酶结合BLI快速检测S.aureus的方法，其特征在于：步骤2)中具体操作时，将活化后的AR2G传感器浸入用pH5-6的醋酸-醋酸钠缓冲溶液稀释的浓度为50-100μg/mL的突变的LysGH15中进行固定化600-900秒。

4.如权利要求1所述一种噬菌体裂解酶结合BLI快速检测S.aureus的方法，其特征在于：步骤3)中具体封闭时间可以设置为300秒。

5.如权利要求1所述一种噬菌体裂解酶结合BLI快速检测S.aureus的方法，其特征在于：步骤4)中数学公式(1)、(2)、(3)、(4)分别为：

(1)：y＝0.79905+0.79353/(1+exp((C₃-5.95133)/0.35))；

(2)：y＝0.9241-0.91576/(1+exp((C₆-5.92917)/0.52574))；

(3)：y＝1.012-1.00252/(1+exp((C₉-5.94227)/0.59033))；

(4)：y＝1.07043+1.06011/(1+exp((C₁₂-5.98079)/0.61363))。

6.如权利要求5所述一种噬菌体裂解酶结合BLI快速检测S.aureus的方法，其特征在于：数学公式(1)、(2)、(3)、(4)中：

C₃表示结合时间为3分钟时求得的菌浓度，对应的S.aureus的最低检出限是151CFU/mL；

C₆表示结合时间为6分钟时求得的菌浓度，对应的S.aureus的最低检出限是38CFU/mL；

C₉表示结合时间为9分钟时求得的菌浓度，对应的S.aureus的最低检出限是18CFU/mL；

C₁₂表示结合时间为12分钟时求得的菌浓度，对应的S.aureus的最低检出限是13CFU/mL。