[发明专利]肾上腺组织束状带皮质活细胞标记方法

说明书

本发明提供一种体外靶向肾上腺组织束状带皮质活细胞标记方法，属于生物医药技术领域，293A细胞接种，使之在转染时细胞汇合率为50‑70％；在转染前，用Pac I处理目的质粒；将Pac I处理过的质粒转染细胞；转染一定时间后，加入完全培养液；离心、冻结细胞，水浴溶解；将293细胞铺于培养盘中，加入含病毒上清液；当有细胞脱离漂浮时，收集并纯化，得到重组腺病毒；诱导腺病毒转染绿色荧光蛋白的肾上腺组织束状带皮质活细胞的分选。本发明利用腺病毒进行细胞标记，利用293细胞作为包装细胞，通过倍比扩增，富集病毒颗粒，并通过CsCl梯度离心，透析进行分离纯化，提高了细胞分选的纯化度，可以大规模应用于肾上腺组织束状带皮质活细胞标记技术。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，具体涉及一种体内或体外靶向肾上腺组织束状带皮质活细胞标记方法。

背景技术

随着细胞治疗和基因治疗技术的不断发展，细胞的相关研究已经逐渐成为当前医学乃至整个生命科学领域中的研究热点，细胞培养已经成为科研中一个很重要的技术，而要获得较纯的目的细胞，细胞分选、纯化已成为关键的问题。细胞分选(sell sorting)是根据细胞所具有的特性将某种特定的细胞亚群从混合的细胞样品中分离出来的一种技术，在需要对某种特定的细胞进行功能分析时，如对细胞培养上清液通过ELISA分析检测细胞分子、细胞共培养检测细胞功能等研究都以获得高纯度的目的细胞为前提。

肾上腺皮质是构成肾上腺外层的内分泌腺组织。它能分泌由数种类固醇混合而成的肾上腺皮质激素，皮质内还含有为数更多的类固醇。肾上腺皮质由3层构成，最外层为球状带(zona glomerulosa)，接着为占大部分的束状带(zona fasciculata)，内层为网状带(zona seticularis)。球状带腺细胞排列成短环状或球状，主要分泌盐皮质激素，人主要为醛固酮。束状带位于皮质中间，腺细胞排列成垂直于腺体表面呈束状，构成皮质的大部分。网状带位于皮质最内层，腺细胞排列不规则。束状带与网状带分泌糖皮质激素，人以皮质醇为主，小鼠以皮质酮为主，网状带还分泌少量性激素。其中束状带功能异常在临床疾病中较为常见，可以引起肾上腺皮质功能亢进、肾上腺皮质功能减退、肾上腺皮质增生等。目前，据统计肾上腺皮质功能异常在临床肾上腺疾病中占据较大比率。

因此，肾上腺皮质细胞研究具有重要的基础科研和临床研究意义，该项不仅可用于激素调节和甾类产生的深入研究，而且可用于对肾上腺组织皮质活细胞进行精准靶向分选，对于肾上腺皮质功能亢进、肾上腺皮质功能减退、肾上腺皮质增生等临床疾病的研究具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用外源性绿色荧光蛋白(GFP)或者红色荧光蛋白(cherry)，通过腺病毒载体将其转染到小鼠肾上腺组织束状带皮质活细胞中，且成本低、操作简便、转移效率高的体外靶向肾上腺组织束状带皮质活细胞标记方法，以解决上述背景技术中存在的至少一项技术问题。

为了实现上述目的，本发明采取了如下技术方案：

一方面，本发明提供一种体外靶向肾上腺组织束状带皮质活细胞标记方法，包括：

293A细胞接种，使之在转染时细胞汇合率为50-70％；

在转染前，用Pac I处理目的质粒；

将Pac I处理过的质粒转染细胞；

转染一定时间后，加入完全培养液；

离心、冻结细胞，水浴溶解；

将293细胞铺于培养盘中，加入含病毒上清液；

当有细胞脱离漂浮时，收集并纯化，得到重组腺病毒；

诱导腺病毒转染绿色荧光蛋白的肾上腺组织束状带皮质活细胞的分选。