[发明专利]肾上腺组织束状带皮质活细胞标记方法

权利要求书

1.一种体外靶向肾上腺组织束状带皮质活细胞标记方法，其特征在于，包括：

293A细胞接种，使之在转染时细胞汇合率为50-70％；

在转染前，用Pac I处理目的质粒；

将Pac I处理过的质粒转染细胞；

转染一定时间后，加入完全培养液；

离心、冻结细胞，水浴溶解；

将293细胞铺于培养盘中，加入含病毒上清液；

当有细胞脱离漂浮时，收集并纯化，得到重组腺病毒；

诱导腺病毒转染绿色荧光蛋白的肾上腺组织束状带皮质活细胞的分选。

2.根据权利要求1所述的体外靶向肾上腺组织束状带皮质活细胞标记方法，其特征在于，将两种不同浓度的CsCl溶液加入离心管中制备CsCl梯度溶液；将最终富集病毒颗粒的病毒上清滴加于CsCl梯度溶液上；离心后，得到腺病毒空壳和活病毒颗粒。

3.根据权利要求1所述的体外靶向肾上腺组织束状带皮质活细胞标记方法，其特征在于，利用腺病毒进行细胞分选包括：以多个不同相对细胞数的病毒颗粒感染靶细胞；加入聚凝胺，离心，感染。

4.根据权利要求3所述的体外靶向肾上腺组织束状带皮质活细胞标记方法，其特征在于，以相对细胞数1：1，10：1，100：1，1000：1的病毒颗粒感染靶细胞。

5.根据权利要求4所述的体外靶向肾上腺组织束状带皮质活细胞标记方法，其特征在于，加入相对培养液体积1：1000的聚凝胺。

6.根据权利要求1所述的体外靶向肾上腺组织束状带皮质活细胞标记方法，其特征在于，通过PCR扩增技术对重组腺病毒进行鉴定。

7.根据权利要求6所述的体外靶向肾上腺组织束状带皮质活细胞标记方法，其特征在于，对重组腺病毒进行鉴定，包括：病毒上清加上PCR-grade Protease K，煮沸，离心后取进行PCR反应。

8.根据权利要求1所述的体外靶向肾上腺组织束状带皮质活细胞标记方法，其特征在于，在TBS中透析一小时，随后在含有10％甘油的TBS中透析两次，每次一小时。

9.根据权利要求8所述的体外靶向肾上腺组织束状带皮质活细胞标记方法，其特征在于，在Eppendorf Biophotometer中测量透析液中的总蛋白量，其中，1μg病毒蛋白相当于4×10⁹个病毒颗粒。

10.根据权利要求1所述的体外靶向肾上腺组织束状带皮质活细胞标记方法，其特征在于，利用小鼠靶向肾上腺皮质细胞的Akr1b7启动子或者Cyp11b1启动子或者人的Cyp11b1启动子进行腺病毒构建，所述小鼠的Akr1b7启动子的碱基序列如SEQ No.1所示，小鼠的Cyp11b1启动子的碱基序列如SEQ No.2所示，人的Cyp11b1启动子的碱基序列如SEQ No.3所示。