[发明专利]用于检测细胞内FXR蛋白SUMO化修饰程度的融合蛋白组、重组载体组、及检测方法

权利要求书

1.一种用于检测细胞内FXR蛋白SUMO化修饰程度的融合蛋白组，其特征在于：由融合蛋白YNF和融合蛋白YCS组成，所述融合蛋白YNF对应的氨基酸序列具体为序列表中序列10；所述融合蛋白YCS对应的氨基酸序列具体为序列表中序列16；所述融合蛋白YNF由FXR和位于其N末端的荧光蛋白片段YN组成；所述融合蛋白YCS由SUMO1Δ和位于其N末端的荧光蛋白片段YC组成；

所述SUMO1Δ是在完整的SUMO1蛋白的C末端截去4个氨基酸得到1-97位氨基酸的活化蛋白分子SUMO1Δ，

所述荧光蛋白为黄色荧光蛋白EYFP，氨基酸序列为序列表中序列6；所述荧光蛋白片段YN由黄色荧光蛋白EYFP从N末端起1-155位氨基酸所组成；所述荧光蛋白片段YC由黄色荧光蛋白EYFP从N末端起156-239位氨基酸所组成；所述连接肽的氨基酸序列为序列表中序列8。

2.根据权利要求1所述的用于检测细胞内FXR蛋白SUMO化修饰程度的融合蛋白组，其特征在于：所述融合蛋白YNF从N末端起依次为荧光蛋白片段YN、连接肽、FXR氨基酸序列；所述融合蛋白YCS从N末端起依次为荧光蛋白片段YC、连接肽、SUMO1Δ氨基酸序列。

3.一种DNA分子组，其特征在于：由融合蛋白YNF和融合蛋白YCS对应的核酸编码序列组成，融合蛋白YNF对应的DNA分子核苷酸序列为序列9，融合蛋白YCS对应的DNA分子核苷酸序列为序列15。

4.一种重组载体组，其特征在于：由表达权利要求2所述的融合蛋白组的重组质粒组成；所述表达融合蛋白YNF的重组质粒为将融合蛋白YNF对应的DNA分子核苷酸序列插入载体质粒所组成；所述表达融合蛋白YCS的重组质粒为将融合蛋白YCS对应的DNA分子核苷酸序列插入载体质粒所组成。

5.权利要求1或2所述的融合蛋白组、权利要求3所述的DNA分子组、权利要求4所述的重组载体组在制备利用BiFC体系检测影响细胞内FXR蛋白SUMO化修饰程度的检测试剂的中的应用。

6.一种非诊断目的用BiFC体系检测影响细胞内FXR蛋白SUMO化修饰程度的物质的方法，其特征在于：包括如下步骤：将待测物作用于瞬时转染权利要求4所述的重组载体组的细胞，检测处理后的细胞中的黄色荧光信号；若处理后的细胞相比于对照组细胞荧光信号强度下降，则表示该待测物质能下调FXR蛋白的SUMO化修饰；若处理后的细胞相比于对照组细胞荧光信号强度上升，则表示该待测物质能上调FXR蛋白的SUMO化修饰。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述待测物为小分子化合物或生物大分子。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：若为小分子化合物，则将化合物加入到细胞培养基中进行培养；若为蛋白或核酸，则将含有该蛋白对应编码基因的载体质粒或核酸通过转染导入细胞中。