[发明专利]一种同时检测TSWV、TZSV、PCSV、INSV四种病毒的多重RT-PCR方法及试剂盒

权利要求书

1.一种同时检测TSWV、TZSV、PCSV、INSV四种病毒的多重RT-PCR方法，其特征在于，所述的方法包括以下四组引物：

PCSV-muF：5'-GTTCGTTTTCTGCGGTAAGCAAA-3'；

PCSV-muR：5-AGCAACATCATAATTGGGAGG-3'；

INSV-muF：5-GAACATGACTACTGCATCTTG-3'；

INSV-muR：5-TAGACATGTCAATTCCAAGC-3'；

TSWV-muF：5-GATGAGTGTTATTTCATGTCTGAC-3'；

TSWV-muR：5-CAAGCTATCAAGCCTTCTGAAG-3'；

TZSV-muF：5-CAAGAACTATTGGCTGGAG-3'；

TZSV-muR：5-GCTGCTCTTCTTCTTTGGTGCCTG-3'。

2.根据权利要求1所述的多重RT-PCR方法，其特征在于，所述的方法中PCR反应体系共30ul，其中2xPCRmix 15ul，cDNA模板1.5ul，TSWV-muF/TSWV-muR各0.5ul，TZSV-muF/TZSV-muR各0.3-0.4ul，INSV-muF 0.2ul，INSV-muR0.3 ul，PCSV-muF/PCSV-muR各0.4-0.5ul，ddH₂O补至30ul；上述体系中引物浓度均为10μM。

3.根据权利要求1所述的多重RT-PCR方法，其特征在于，所述的方法中PCR反应程序为，95℃预变性3min，94℃变性30s，54℃退火30-35s，72℃延伸40s，重复变性、退火、延伸共计32个循环，最后72℃延伸5min。

4.根据权利要求1所述的多重RT-PCR方法，其特征在于，所述引物组PCSV-muF/PCSV-muR扩增后的产物大小为220bp。

5.根据权利要求1所述的多重RT-PCR方法，其特征在于，所述引物组INSV-muF/INSV-muR扩增后的产物大小为422bp。

6.根据权利要求1所述的多重RT-PCR方法，其特征在于，所述引物组TSWV-muF/TSWV-muR扩增后的产物大小为157bp。

7.根据权利要求1所述的多重RT-PCR方法，其特征在于，所述引物组TZSV-muF/TZSV-muR扩增后的产物大小为779bp。

8.一种包含权利要求1所述引物组的检测试剂盒。