[发明专利]一种番茄侧枝发生的调控方法

权利要求书

1.一种番茄侧枝发生的调控方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤（1）：番茄SlERF025基因的克隆，番茄SlERF025基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

步骤（2）：目的基因片段的回收；

步骤（3）：将目的基因连接到植物表达载体；

步骤（4）：重组质粒转化大肠杆菌；

步骤（5）：农杆菌介导遗传转化。

2.根据权利要求1所述的番茄侧枝发生的调控方法，其特征在于，所述步骤（1）的具体操作步骤如下：

提取野生型番茄植株叶片的总RNA，反转录出cDNA的第一条链，以获得的cDNA为模板，扩增全长，引物为：

SlERF025-L：TACGAACGATACTCGACCCCATGGCTGCTTATCATTTTAATG，SlERF025-R: CTAGAGTCGACGGATCCCCCTGGATAACCCCAGAGACTATCT进行PCR扩增。

3.根据权利要求1所述的番茄侧枝发生的调控方法，其特征在于，所述步骤（2）的具体操作步骤如下：

a.将上一步骤中的PCR产物在150V电压条件下进行琼脂糖凝胶电泳；

b.紫外光照射，观察琼脂凝胶中的条带，将所需目的基因条带切下，放入离心管中，称量、加入同体积的PN溶液，50℃水浴将凝胶进行融化；

c.柱平衡：向吸附柱CA2中加入500 μL的平衡液，放入离心机，转速为12000 r/min，离心1 min后倒掉废液；

d.将第二步骤中获得的溶液加入吸附柱CA2中，于室温静置2 min，以12000 r/min的转速离心1 min，倒掉废液；

e.向吸附柱CA2中加600 μL漂洗液PW，放入离心机，12000 r/min离心1 min，倒掉废液；

f.重复操作步骤e；

g.将吸附柱放于收集管，12000 r/min离心2 min，除去多余的漂洗液，室温晾干；

h.将吸附柱放到一个新的离心管，向吸附柱中央加入40 μL ddH₂O，静置2 min后，12000r/min离心2 min洗脱DNA。

4.根据权利要求1所述的番茄侧枝发生的调控方法，其特征在于，所述步骤（3）的具体操作为：采用同源重组的原理，用限制性内切酶SmaI酶切pCambia1300-YFP载体，利用无缝克隆技术将目标基因片段连接到pCambia1300-YFP载体上，构建过表达载体。

5.根据权利要求1所述的番茄侧枝发生的调控方法，其特征在于，所述步骤（4）的具体步骤如下：

i.取低温-80℃保存的50 μL Trans1-T1感受态细胞，将其置于冰上进行融化；

ii.打开超净工作台进行紫外消毒后，在上面把2 μL的重组产物加入到感受态细胞中，轻轻拨打离心管壁混匀，冰上静置30min；

iii.42℃水浴30 s，之后迅速转移到冰上冷却2 min；

iv.加入400 μL的LB液体培养基，在37℃摇床中200 r/min培养1 h；

v.将混合液12000 rpm离心1min，留取50 μL上清液，菌液重悬后均匀地涂在含有Kan抗性的LB固体培养基上，37℃静置培养过夜；

vi. 挑取培养好的大肠杆菌菌落，进行菌落PCR，通过琼脂糖凝胶电泳验证，选取验证为阳性的菌落，重新加入含有Kan抗性的LB液体培养基中，37℃，12000 r/min，过夜培养，将剩余菌液与30%浓度甘油混合，保存于-80℃冰箱中备用。

6.根据权利要求2所述的番茄侧枝发生的调控方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应条件为94℃，3min；94℃，25s；55℃，25s；72℃，15s；72℃，5min。