[发明专利]一种人源性类器官库的制备方法

权利要求书

1.一种人源性类器官库的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)获取标本，将标本分为测序部分以及培养部分；

(2)标本的测序部分放入RNA保存液中，进行全基因组测序，并根据目标基因进行分类；

(3)标本的培养部分进行类器官培养；

(4)类器官培养时依据类器官生长情况，每2-3天换液一次，每4-6天传代一次，传代时一半以1:2的比例进行传代，一半进行冻存；

(5)将每一代冻存的类器官进行编号分类存放，直至第八代时冻存全部类器官。

2.根据权利要求1所述的一种人源性类器官库的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述标本为已经脱离人体的有细胞活性的组织。

3.根据权利要求1所述的一种人源性类器官库的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，培养部分进行类器官培养，至少培养6孔。

4.根据权利要求1所述的一种人源性类器官库的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述标本的培养部分进行类器官培养的方法为：

(31)获取标本的培养部分组织；

(32)使用双抗-PBS清洗组织4-5次；

(33)切碎组织，使用消化液消化，至组织尺寸大小小于1mm*1mm；

(34)过滤纤维组织，进一步使用移液枪打散组织，并离心；

(35)弃上清，离心；

(36)弃上清后，使用PBS重悬组织，离心；

(37)弃上清后加入基质胶，基质胶的加入量与初始人肠腺瘤组织大小的比例关系为：每0.3cm*0.5cm*0.5cm大小的初始人肠腺瘤组织加入1000μl-1200μl的基质胶，所述基质胶货号为Corning 356231，重悬组织，加入孔板中；

(38)待基质胶凝固后，加入培养基和Y27632，于培养箱中培养。

5.根据权利要求4所述的一种人源性类器官库的制备方法，其特征在于，步骤(31)中，获取的组织保存在4℃预冷的保存液中，所述保存液购于上海诺典生物技术有限公司，货号为ND-2001-PS 100mL。

6.根据权利要求4所述的一种人源性类器官库的制备方法，其特征在于，步骤(32)中，双抗-PBS溶液为每500mlPBS溶液中加入5ml双抗得到的混合溶液，所述双抗购于武汉赛维尔生物科技有限公司，货号G4003-100ML，成分为青霉素-链霉素混合液，PBS购于武汉赛维尔生物科技有限公司，货号G4202-500ML，为磷酸盐缓冲液；

步骤(2)中，使用双抗-PBS清洗人肠腺瘤组织每次5-10min。

7.根据权利要求4所述的一种人源性类器官库的制备方法，其特征在于，步骤(33)中，消化液购于上海诺典生物技术有限公司，货号为ND-3001-DS 100ML；

步骤(35)中，若可见红色，则使用红细胞裂解液重悬组织，静置待红色消失后，再进行离心。

8.根据权利要求4所述的一种人源性类器官库的制备方法，其特征在于，步骤(35)中，红细胞裂解液购于天津灏洋华科生物科技有限公司，货号NH4CL2009。

9.根据权利要求4所述的一种人源性类器官库的制备方法，其特征在于，步骤(37)中，24孔板中一孔加入75ul基质胶类器官悬浊液。

10.根据权利要求4所述的一种人源性类器官库的制备方法，其特征在于，步骤(38)中，每孔加入500ul培养基以及10μmol浓度为10uM的Y27632；

步骤(38)中，加入的培养基购于上海诺典生物技术有限公司，货号为ND-1007-CM100ML，加入的Y27632型号为Tocris 1254/10。