[发明专利]一种人源性类器官库的制备方法

说明书

本发明涉及一种人源性类器官库的制备方法，包括以下步骤：获取标本，将标本分为测序部分以及培养部分；标本的测序部分放入RNA保存液中，进行全基因组测序，并根据目标基因进行分类；标本的培养部分进行类器官培养；类器官培养时依据类器官生长情况，每2‑3天换液一次，每4‑6天传代一次，传代时一半以1:2的比例进行传代，一半进行冻存；将每一代冻存的类器官进行编号分类存放，直至第八代时冻存全部类器官。本发明通过测序的方法对类器官进行分类。可以依据不同种类类器官不同目标基因进行分类，对不同部位不同种类的类器官都十分适用。通过冻存、复苏类器官可以及时获取各个标本在不同时期的类器官模型，对基础实验和药筛都有可选择的空间。

技术领域

本发明属于细胞处理技术领域，尤其是涉及一种人源性类器官库的制备方法。

背景技术

传统的类器官研究局限于小鼠标本或某个人源性手术标本，通过进行病毒转染、免疫组化等纵向比较的方式进行实验研究。这样的方法由于基因的异质性问题而存在一定的局限性，在应用方面前景较小。而在临床方面，类器官最有意义的应用在于个性化的药物筛选以及药物实验。过去的药筛是通过获取患者的手术标本进行培养，通过不同药物、不同浓度药物的应用来择优选取最适合患者的治疗方案。这样的方法实验周期较长，患者需先选用保守的治疗方法以等待药筛结果。

传统的类器官培养标本是通过构建动物模型获取的，这种获取方式存在不确定性高、与人源性基因有一定的差别、异质性存在不足等问题，难以得到有临床意义的实验结果，在实际应用方面存在不足。而类器官作为目前临床药筛的工具，培养周期长、获得结果慢的问题也日渐突出。

发明内容

基于现有技术中类器官培养方法存在的培养周期长等问题，本发明提供一种人源性类器官库的制备方法。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

本发明提供一种人源性类器官库的制备方法，包括以下步骤：

(1)获取标本，将标本分为测序部分以及培养部分；

(2)标本的测序部分放入RNA保存液中，进行全基因组测序，并根据目标基因进行分类；

(3)标本的培养部分进行类器官培养；

(4)类器官培养时依据类器官生长情况，每2-3天换液一次，每4-6天传代一次，传代时一半以1:2的比例进行传代，一半进行冻存；

(5)将每一代冻存的类器官进行编号分类存放，直至第八代时冻存全部类器官。

在本发明的一个实施方式中，步骤(1)中，所述标本为已经脱离人体的有细胞活性的组织。本发明的方法不是以获得诊断结果或健康状况为直接目的的。

在本发明的一个实施方式中，步骤(3)中，培养部分进行类器官培养，至少培养6孔。

在本发明的一个实施方式中，步骤(3)所述标本的培养部分进行类器官培养的方法为：

(31)获取标本的培养部分组织；

(32)使用双抗-PBS清洗组织4-5次；

(33)切碎组织，使用消化液消化，至组织大小小于1mm*1mm；

(34)过滤纤维组织，进一步使用移液枪打散组织，并离心；

(35)弃上清，离心；

(36)弃上清后，使用PBS重悬组织，离心；

(37)弃上清后加入基质胶，基质胶的加入量与初始人肠腺瘤组织大小的比例关系为：每0.3cm*0.5cm*0.5cm大小的初始人肠腺瘤组织加入1000μl-1200μl的基质胶，所述基质胶货号为Corning 356231，重悬组织，加入孔板中；