[发明专利]一种可口革囊星虫腔液细胞的抗菌活性物质提取方法

权利要求书

1.一种可口革囊星虫腔液细胞的抗菌活性物质提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、采集可口革囊星虫腔液；

S2、从腔液中分离出腔液细胞；

S3、将提取液加入腔液细胞，混匀并使细胞完全裂解，裂解液离心，取上清液离心，去除沉淀及杂质，得到抗菌物质抽提液；

S4、将抽提上清液用沸水浴处理，离心去除不耐热的蛋白及杂质沉淀，得到抗菌物质纯化液；

S5、对抗菌物质纯化液用透析液进行透析，透析后进行离心超滤浓缩，得到可口革囊星虫腔液细胞的抗菌活性物质。

2.根据权利要求1所述的可口革囊星虫腔液细胞的抗菌活性物质提取方法，其特征在于，所述步骤S4具体包括：将步骤S3获得的抽提上清液在100℃沸水浴处理5-10min，常温下离心10-15min，离心机转速为12000-15000rpm/min，除去不耐热的蛋白和其他杂质沉淀，取上清液得到抗菌物质抽提液。

3.根据权利要求1所述的可口革囊星虫腔液细胞的抗菌活性物质提取方法，其特征在于，所述步骤S3中的提取液由乙酸和0.01M PBS缓冲液配置而成，提取液中乙酸浓度为10％。

4.根据权利要求3所述的可口革囊星虫腔液细胞的抗菌活性物质提取方法，其特征在于，所述步骤S3具体包括：

S31、将提取液加入步骤S2获得的腔液细胞，在涡旋震荡器中充分混匀并使细胞完全裂解；

S32、将裂解液于常温下离心5-10min，离心机转速为4000-5000rpm/min，取上清液；

S33、将上清液于常温下离心10-15min，离心机转速为12000-15000rpm/min，弃除沉淀及最上层白色脂质等杂质，保留上清液得到抗菌物质抽提液。

5.根据权利要求4所述的可口革囊星虫腔液细胞的抗菌活性物质提取方法，其特征在于，所述步骤S33中将步骤S32得到的上清液离心2-5次。

6.根据权利要求1所述的可口革囊星虫腔液细胞的抗菌活性物质提取方法，其特征在于，所述步骤S5中的透析液由乙酸和0.01M PBS缓冲液配置而成，透析液中乙酸浓度为0.1％。

7.根据权利要求6所述的可口革囊星虫腔液细胞的抗菌活性物质提取方法，其特征在于，所述步骤S5具体包括：

S51、将步骤S4获得的抗菌物质纯化液放入孔径为1kD的透析袋中，置于透析液中，在2-5℃温度下透析12-24h；

S52、将透析袋置于新的透析液中，在2-5℃温度下透析12-24h；

S53、透析上清用1kD超滤管进行离心超滤浓缩，所得上清液为可口革囊星虫腔液细胞的抗菌活性物质。

8.根据权利要求1所述的可口革囊星虫腔液细胞的抗菌活性物质提取方法，其特征在于，所述步骤S2具体包括：将步骤S1得到的腔液在2-5℃环境中静置8-12h，进行离心，离心机转速为3000-4000rpm/min，除去上清液，得到底部白色的腔液细胞。

9.根据权利要求1所述的可口革囊星虫腔液细胞的抗菌活性物质提取方法，其特征在于，所述步骤S1具体包括：将可口革囊星虫清洗干净，在可口革囊星虫的尾端基部开口，将腔液挤入离心管收集。