[发明专利]一种检测植物蛋白饮料椰子成分LAMP恒温扩增方法

说明书

本发明提出一种检测植物蛋白饮料椰子成分LAMP恒温扩增方法，步骤有：1、准备植物蛋白饮料DNA样品及LAMP恒温扩增特异性引物；植物蛋白饮料DNA样品经超微量分光光度计测定后，其A260/A280在1.7‑2.0之间，DNA浓度＞10ng/μL；LAMP恒温扩增特异性引物是选取椰子特异性基因序列合成得到，椰子基因采用椰子3a(Hd3a)基因；特异性基因序列在椰子基因中的位置为451‑1300bp；LAMP恒温扩增特异性引物为：外引物F3/B3、内引物FIB/BIP、环引物LB；2、采用LAMP恒温扩增反应体系对植物蛋白饮料DNA样品进行LAMP恒温扩增，检测荧光信号，得到检测结果。本发明对椰子成分鉴别的灵敏度高、特异性高，可用于植物蛋白饮料中椰子成分的快速检测。

技术领域

本发明属于分子生物技术领域，具体是涉及一种用于检测植物蛋白饮料中椰子成分LAMP恒温扩增方法。

背景技术

椰子是棕榈科植物椰子树的果实，椰汁及椰肉中含有蛋白质、糖类、油脂类、维生素类、钙、磷、铁等微量元素及矿物质，深受广大消费者的喜爱。近年来，以椰子为原料的植物蛋白饮料(如椰子汁)凭借其“天然、绿色、营养、健康”等优势得到迅猛发展，在当前市场上占比较重。随着市场需求激增和原料价格的上涨，部分生产企业为了减少生产成本，使用低价的大豆或其他廉价为原材料伪造椰子饮料，并以低价抢占市场。目前植物蛋白饮料针对椰子成分检测的方法没有相关的检验标准，相关文献仅见普通PCR检测方法，由于植物蛋白饮料在市场上流通大，普通PCR检验技术流程较繁琐，需通过电泳结果判断阴阳性，不能实时监控整个检测过程，此外对操作人员要求较高，难以在广大基层中开展大量推广应用。

LAMP检测技术，全称为环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermalamplification，LAMP)，最早是日本学者在《Nucleic Acids Res》公开一种适用于基因诊断的恒温核酸扩增技术，该技术主要原理是利用具有链置换特异性的Bst DNA聚合酶和4～6条能够特异性识别靶标序列上多个特异性区域的引物，开启循环链置换反应，从而实现等温条件下的连续快速反应。该技术具有特异性强、灵敏度高、检测成本低、所需设备及人员要求不高，操作简单，反应时间短等优点，适合现场大批量样本快速检测。

因此，非常有必要建立一套特异性好、灵敏度高、适合在基层及保障现场应用的植物蛋白饮料椰子成分LAMP恒温扩增方法，为抵制椰子蛋白饮料掺杂掺假问题提供高效的检测方法，为保障饮料行业食品质量与安全提供新的技术支撑。

发明内容

本发明的目的是提出一种检测植物蛋白饮料椰子成分LAMP恒温扩增方法，其对椰子成分鉴别的灵敏度高、特异性高，可用于植物蛋白饮料中椰子成分的快速检测。

本发明的目的可通过以下技术方案实现：

一种检测植物蛋白饮料椰子成分LAMP恒温扩增方法，其包括有以下步骤：

步骤1、准备植物蛋白饮料DNA样品，以及准备对植物蛋白饮料DNA样品进行LAMP恒温扩增的LAMP恒温扩增特异性引物；

所述植物蛋白饮料DNA样品经超微量分光光度计测定后，其A260/A280在1.7-2.0之间，DNA浓度＞10ng/μL，于-20℃保存备用；

所述LAMP恒温扩增特异性引物是选取椰子特异性基因序列进行合成得到，所述椰子基因采用：椰子3a(Hd3a)基因，其登录号为MH092984.1；所述特异性基因序列在所述椰子基因中的位置为451-1300bp；

所述LAMP恒温扩增特异性引物为：

外引物F3：5’-CTCCAAGTCCAAGTGACC-3’

外引物B3：5’-GTGGAGCTAGTTTTGTTCC-3’

内引物FIB：5’-CATGGCTTCCCGATGGGTACCTCAGGGAGTATTTGCACTG-3’