[发明专利]一种检测植物蛋白饮料椰子成分LAMP恒温扩增方法

权利要求书

1.一种检测植物蛋白饮料椰子成分LAMP恒温扩增方法，其特征在于包括有以下步骤：

步骤1、准备植物蛋白饮料DNA样品，以及准备对植物蛋白饮料DNA样品进行LAMP恒温扩增的LAMP恒温扩增特异性引物；

所述植物蛋白饮料DNA样品经超微量分光光度计测定后，其A260/A280在1.7-2.0之间，DNA浓度＞10ng/μL，于-20℃保存备用；

所述LAMP恒温扩增特异性引物是选取椰子特异性基因序列进行设计合成得到，所述椰子基因采用：椰子3a(Hd3a)基因，其登录号为MH092984.1；所述特异性基因序列在所述椰子基因中的位置为451-1300bp；

所述LAMP恒温扩增特异性引物为：

外引物F3：5’-CTCCAAGTCCAAGTGACC-3’

外引物B3：5’-GTGGAGCTAGTTTTGTTCC-3’

内引物FIB：5’-CATGGCTTCCCGATGGGTACCTCAGGGAGTATTTGCACTG-3’

内引物BIP：5’-GCTATATATTGGGCCGGACTTCGCAATCTCTTCTCTTCCTTGT-3’

环引物LB：5’-ACTCTTCAGCGGGTGCTTAC-3’

步骤2、采用LAMP恒温扩增反应体系，对植物蛋白饮料DNA样品进行LAMP恒温扩增，检测扩增产物的荧光信号，得到检测结果；其中，所述LAMP恒温扩增反应体系包括有所述LAMP恒温扩增特异性引物。

2.根据权利要求1所述的一种检测植物蛋白饮料椰子成分LAMP恒温扩增方法，其特征在于：步骤1中植物蛋白饮料为固体或含有固形物的液体时，固体植物蛋白饮料按该固体植物蛋白饮料说明书进行温水冲调，搅拌均匀，得到液态的植物蛋白饮料待提取样；含有固形物的液体植物蛋白饮料使用研磨机将固形物研磨充分，得到液态的植物蛋白饮料待提取样；对所述植物蛋白饮料待提取样进行DNA提取，得到步骤1的植物蛋白饮料DNA样品。

3.根据权利要求1或2所述的一种检测植物蛋白饮料椰子成分LAMP恒温扩增方法，其特征在于：所述LAMP恒温扩增反应体系为25μL，包括有内引物FIP(100μmol/L)和内引物BIP(100μmol/L)各0.4μL，外引物F3(100μmol/L)和外引物B3(100μmol/L)各0.05μL，环引物LB(100μmol/L)0.2μL；其余试剂组分分别为：10×Thermo pol Buffer 2.5μL，MgSO₄(100mmol/L)1μL，dNTPs(10mmol/L)2.5μL，甜菜碱(5mol/L)6μL，Bst酶(8U/μL)1μL，染料(250×)0.5μL，DNA模板2μL，ddH₂O 8.4μL。

4.根据权利要求3所述的一种检测植物蛋白饮料椰子成分LAMP恒温扩增方法，其特征在于：所述LAMP恒温扩增反应体系中，采用的恒温扩增仪的LAMP恒温扩增条件为：扩增温度是63℃，进行45个循环，每个循环的扩增时间是60s；采用的实时荧光PCR仪的荧光信号扩增条件为：第一步63℃条件下扩增30s，第二步63℃条件下扩增15s、进行45个循环，第三步63℃条件下扩增45s、进行45个循环。