[发明专利]一种从红刀豆中提取脲酶的方法

权利要求书

1.一种从红刀豆中提取脲酶的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)提取：称取红刀豆研磨成粉，筛分后加入提取液，28℃下将红刀豆粉末和提取液充分搅拌，使得红刀豆粉末中脲酶全部浸提，然后将浸提液在室温下离心，收集上清液A，上清液A滤纸抽滤，得到上清液B；

2)粗沉淀：在得到的上清液B加入60％PEG4000，在4℃温度下静置，离心，收集沉淀；

3)重悬：将得到的沉淀加入重悬液，重悬溶解后离心，收集上清并抽滤，得到溶液A；

4)调整pH值：先用HCl将得到的溶液A调为pH＝5.1，离心，收集上清，再用NaOH将溶液调为pH＝6.0，得到溶液B；

5)冻干：将得到的溶液B加入至柠檬酸-柠檬酸钠中进行透析，在4℃温度下静置，离心，抽滤，收集上清，冻干。

2.根据权利要求1所述的从红刀豆中提取脲酶的方法，其特征在于：步骤1)中，提取液是50mM柠檬酸-柠檬酸钠+3％PEG4000溶液，红刀豆粉末和提取液按照150-250g:1L的料液比进行混合。

3.根据权利要求1所述的从红刀豆中提取脲酶的方法，其特征在于：步骤1)中，红刀豆研磨成粉后，用振动筛进行筛分，以除去颗粒度较大的不溶性杂质，红刀豆粉末和提取液采用磁力搅拌，搅拌时间为20-40min；离心转速为9000-10000rpm，离心时间为8-12min。

4.根据权利要求1所述的从红刀豆中提取脲酶的方法，其特征在于：步骤2)中，60％PEG4000溶液采用滴加方式缓慢加入，终浓度为10％。

5.根据权利要求1所述的从红刀豆中提取脲酶的方法，其特征在于：步骤2)中，离心温度为3-5℃，离心转速为9000-10000rpm，离心时间为18-22min。

6.根据权利要求1所述的从红刀豆中提取脲酶的方法，其特征在于：步骤3)中，重悬液的成分为50mM柠檬酸-柠檬酸钠、5mg/ml甘氨酸、5mg/ml葡萄糖、30mg/ml山梨醇。

7.根据权利要求1所述的从红刀豆中提取脲酶的方法，其特征在于：步骤3)中，离心温度为7-9℃，离心转速为9000-10000rpm，离心时间为25-35min。

8.根据权利要求1所述的从红刀豆中提取脲酶的方法，其特征在于：步骤4)中，先用10％的HCl将得到的溶液A调为pH＝5.1，离心，收集上清，在用6M NaOH将溶液调为pH＝6.0，得到溶液B。

9.根据权利要求1所述的从红刀豆中提取脲酶的方法，其特征在于：步骤4)中，离心温度为16-20℃，离心转速为9000-10000rpm，离心时间为25-35min。

10.根据权利要求1所述的从红刀豆中提取脲酶的方法，其特征在于：步骤5)中，使用10mM柠檬酸钠进行透析，透析完后离心，离心条件为4℃、9500rpm，30min；上清使用0.45μM滤膜抽滤，抽滤后液体进行冷冻干燥。