[发明专利]一种乳牙牙髓干细胞冻存液及其制备冻存方法及应用

权利要求书

1.一种乳牙牙髓干细胞冻存液，其特征在于，所述冻存液各成分组成为：甘油：10％；甘露醇：1mg/mL；PEG：1mg/mL；精氨酸：5mg/mL；人血清白蛋白：1-5mg/mL；肝素钠：10-15mg/mL；SDS：0.1mg/mL；其余为DMEM；％代表体积比。

2.一种如权利要求1所述的乳牙牙髓干细胞冻存液的制备方法，其特征在于，所述方法的步骤包括：

S1、用DMEM作溶剂，分别用甘露醇、PEG、精氨酸、肝素钠以及SDS做溶质，制备出各自的浓储液，并均过滤除菌后冷存待用；

S2、将S1中制备的各种浓储液以及甘油、人血清白蛋白、DMEM按比例混合，得到所述冻存液。

3.根据权利要求2所述的乳牙牙髓干细胞冻存液的制备方法，其特征在于，步骤S1中冷存的具体内容包括：在-20℃以下环境中保存。

4.根据权利要求2所述的乳牙牙髓干细胞冻存液的制备方法，其特征在于，步骤S2制备的所述冻存液的保存方法为：-8℃～4℃环境中保存。

5.一种乳牙牙髓干细胞冻存方法，其特征在于，所述方法采用如权利要求1所述的冻存液对乳牙牙髓干细胞进行冻存；所述方法的步骤包括：

S1、获取乳牙牙髓干细胞并进行传代培养；

S2、用PBS漂洗培养的乳牙牙髓干细胞；

S3、向培养器皿中加入胰蛋白酶消化处理一段时间；

S4、向培养器皿中加入含血清的培养基并用移液枪反复吹打至细胞悬浮，得到细胞悬浮液；

S5、将细胞悬浮液进行离心处理并弃去上层培养基，得到沉淀的细胞；

S6、用所述冻存液对沉淀的细胞进行重悬并吹打均匀；

S7、将吹打均匀后的细胞悬液置入细胞冻存器皿中进行冻存。

6.根据权利要求5所述的乳牙牙髓干细胞冻存方法，其特征在于，所述冻存方法还包括：

S8、对冻存结束后的乳牙牙髓干细胞进行复苏。

7.一种如权利要求1所述的乳牙牙髓干细胞冻存液的应用，其特征在于，所述冻存液用于乳牙牙髓干细胞的培养基或添加组合物。