[发明专利]一种烟草的HPLC-GC融合指纹图谱检测方法

权利要求书

1.一种烟草的HPLC-GC融合指纹图谱检测方法，包括：将烟草样品加入含有内标的萃取液进行振荡萃取，获得的第一待测溶液再加入衍生液混合后进行衍生反应，获得第二待测溶液，采用高效液相色谱法测定第一待测溶液后获得第一色谱图，采用气相色谱法测定第二待测溶液后获得第二色谱图，再将第一色谱图与第二色谱图进行剪裁、合并后获得融合指纹图谱；

所述含有内标的萃取液为含有内标的N,N-二甲基甲酰胺溶液，所述内标为磷酸三苯酯；

所述高效液相色谱法中，色谱柱为C₁₈色谱柱；检测器为二极管阵列检测器；流动相为0.05-0.2%甲酸水溶液-甲醇，其中，A相为0.05-0.2%甲酸水溶液，B相为甲醇；分析时间为15min；梯度洗脱；检测波长为：0-1.6min，检测波长为262nm；1.6-8.3min，检测波长为340nm；8.3-9.0min，检测波长为440nm；9.0-10.5min，检测波长为262nm；10.5-15min，检测波长为440nm；

所述气相色谱法中，色谱柱为非极性毛细管色谱柱；检测器为火焰离子化检测器；采用的升温程序为：初始温度为120-130℃保持4-6min，以2-3℃/min的速率升温至200-220℃；继续以9-11℃/min的速率升温至290-310℃，保持14-16min；

所述第一色谱图的剪裁范围保留为0.0-15min，所述第二色谱图的剪裁范围保留为5-55min；所述合并是将第二色谱图向右侧偏移15min置于第一色谱图之后，所述第一色谱图与第二色谱图的合并权重为1:1；

所述衍生液为含三甲基氯硅烷的双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺与N,N-二甲基甲酰胺的混合液；

所述梯度洗脱的具体程序为：0-3.5min，A相：B相体积比为70：30-60：40；3.5-4.5min，A相：B相体积比为60：40-60：40；4.5-7.5min，A相：B相体积比为60：40-0：100；7.5-15min，A相：B相体积比为0：100-0：100。

2.根据权利要求1所述的一种烟草的HPLC-GC融合指纹图谱检测方法，其特征在于，所述衍生反应的反应温度为70-80℃；所述衍生反应的反应时间为25-35min。

3.根据权利要求1所述的一种烟草的HPLC-GC融合指纹图谱检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法中，检测带宽为1.5-2.5nm；检测信号采集速率为9-11Hz/0.025min；柱温为25-35℃；进样量为0.1-2μL；流速为1.0-1.5mL/min。

4.根据权利要求1所述的一种烟草的HPLC-GC融合指纹图谱检测方法，其特征在于，所述气相色谱法中，进样口温度为275-285℃；进样量为0.1-2μL；载气为高纯氦气，载气纯度≥99.999%；载气为恒流模式，载气流速为1-2mL/min；H₂流速为30-50mL/min；空气流速为340-360mL/min；尾吹气N₂+载气流量为9-11mL/min；信号采集速率为9-11Hz/0.02min；进样方式为分流进样，分流比为20-30:1。

5.一种烟草的标准融合指纹图谱的构建方法，包括：采用权利要求1-4任一所述的烟草的HPLC-GC融合指纹图谱检测方法分别对多个烟草样品进行检测，获得多个烟草样品的融合指纹图谱，以图谱中均存在的色谱峰作为共有特征峰，确定共有特征峰的保留时间和峰面积，建立烟草的标准融合指纹图谱。

6.一种烟草的HPLC-GC融合指纹图谱的质量控制方法，包括：采用权利要求1-4任一所述的烟草的HPLC-GC融合指纹图谱检测方法获得的烟草的融合指纹图谱，与采用权利要求5所述的烟草的标准融合指纹图谱的构建方法获得的烟草的标准融合指纹图谱，将烟草样品的色谱峰与相应共有特征峰进行保留时间和峰面积的相似度比较。