[发明专利]酵素生产方法及其酶解生产特定分子段氨基寡糖素应用

权利要求书

1.一种生产特定分子段的氨基寡糖素的方法，其使用甲基营养型芽孢杆菌酵素酶解壳聚糖来生产特定分子段的氨基寡糖素，包括:

Ⅰ按重量比在反应釜中加入壳聚糖4.4%-6.6%，亚磷酸0.4%-0.6%，甲基营养型芽孢杆菌酵素0.4%-0.6%，余量为水；

Ⅱ打开搅拌器和恒温加热系统，50℃±2℃微生物酶解发酵，即可得到氨基寡糖素混合液；

其中通过控制酶解时间、测定粘度来控制氨基寡糖素的聚合度和平均分子量，粘度是由电子数显粘度计测定，聚合度和平均分子量是由DNS法测定；

Ⅳ将氨基寡糖素混合液经80-120目筛过滤滤掉废渣，再微滤滤掉大分子蛋白和酶，得到特定分子段的氨基寡糖素；

所述甲基营养型芽孢杆菌酵素由以下方法制备得到：

包括：

（1）将甲基营养型芽孢杆菌种按5%重量比接种至LB液体培养基中，在温度为30-37℃，转速为180-200r/min条件下培养18-24h，得到甲基营养型芽孢杆菌种子液；

其中LB液体培养基配方：按重量计蛋白胨1%，酵母粉0.5%，氯化钠1%，去离子水补至100%；

（2）将甲基营养型芽孢杆菌种子液按3%-5%重量比接种至扩大培养基中，在温度为30-37℃，转速为180-200r/min条件下培养36-48h，进行扩大培养，得到甲基营养型芽孢杆菌发酵液；

其中扩大培养基配方：按重量计玉米粉1.6%-2.4%、黄豆粕粉1.2%-1.8%、糖蜜0.4%-0.6%、NaCl 0.5%-1%、KH₂PO₄ 0.4%-0.6%、MgSO₄•7H₂O 0.16%-0.24%、CaCO₃ 0.04%-0.06%，水补至100%；

（3）在温度为30-37℃、湿度为85-99%的控温控湿无菌室中，将甲基营养型芽孢杆菌发酵液接种于固体培养基进行培养3-5天；

所述固体培养基配方：按重量计黄豆粕粉25%-30%、麦麸17%-20%、米糠11%-15%、稻壳5%-7%、糖蜜1%-2%、碳酸钙2%-3%、马铃薯浸出液补至100%；

其中所述马铃薯浸出液配制方法：加水将马铃薯煮沸，然后打碎，过滤，便可制得马铃薯浸出液；

（4）培养好之后，对培养产物进行35-45℃无菌烘干，使其含水量降至10%以下，即可得到固体甲基营养型芽孢杆菌酵素；

所述甲基营养型芽孢杆菌种购买自陕西恒田生物农业有限公司。

2.根据权利要求1所述的方法，其具体包括：

Ⅰ按重量比在反应釜中加入壳聚糖 5.5%，亚磷酸0.5%，甲基营养型芽孢杆菌酵素0.5%，余量为水；

Ⅱ打开搅拌器和恒温加热系统，50℃±2℃微生物酶解发酵，即可得到氨基寡糖素混合液；

其中通过控制酶解时间、测定粘度来控制氨基寡糖素的聚合度和平均分子量，粘度是由电子数显粘度计测定，聚合度和平均分子量是由DNS法测定；

Ⅲ将氨基寡糖素混合液经100目筛过滤滤掉废渣，再微滤滤掉大分子蛋白和酶，得到特定分子段的氨基寡糖素。