[发明专利]一种敌百虫半抗原及其制备方法、抗原、抗体及其应用

说明书

本发明涉及药物免疫检测合成技术领域，具体公开了一种敌百虫半抗原、敌百虫半抗原中间体及其合成方法、基于该敌百虫半抗原的敌百虫抗原、特异性针对该敌百虫抗原的敌百虫抗体、其应用等。在将本发明的敌百虫抗原和抗体应用于敌百虫胶体金层析检测装置时，其灵敏度可达到100μg/kg。

技术领域

本发明涉及药物免疫检测合成技术领域，特别是涉及一种高纯度敌百虫半抗原及其合成方法、应用。

背景技术

敌百虫是一种有机磷杀虫剂，属磷酸酯类，为白色晶状粉末，其挥发性较低。1952年，敌百虫由德国拜耳公司合成，在中国生产使用也有近50多年的历史，其在农业上应用范围很广，主要用于防治菜青虫、桑野蚕、象鼻虫、果蝇等多种害虫。但由于其毒性，2017年10月27日，敌百虫被世界卫生组织国际癌症研究机构列为3类致癌物，唐龙等人的研究表明敌百虫对雄性动物具有生殖毒性。

敌百虫的检测分析可采用催化光度法、气相色谱法、气相色谱质谱法、液相色谱质谱法等等。

催化光度法需进行水浴加热，显色容易受到金属离子的干扰；气相色谱法需要转换、萃取等多个环节，操作复杂且容易引入误差；气相色谱质谱法需要进行水样前处理，将敌百虫转化成敌敌畏后测定，操作繁琐，或者测定敌百虫的分解产物，但可能导致测定结果的偏差和定性错误；范俊采用萃取后进样的液相色谱质谱法，耗时较长且萃取和净化所用的试剂污染环境。色谱法的灵敏度较其它方法较高，这些方法能以较高的精度解决部分实际问题。但通常情况下，这些理化分析方法的样本前处理过程相当复杂，所需的仪器也较昂贵，效率比较低下，分析成本较高，对待测物的理化性质的限制严格。这些方法对出现动物可食组织中的敌百虫残留问题不能做出迅速反应，也不适合作为敌百虫在可食动物组织中残留的初筛方法。

针对目前我国对食品安全要求越来越严格的趋势，建立灵敏度高、特异性强、简便易行的动物源性食品中敌百虫残留量的测定方法，为加强食品的贸易进出口把关意义重大。免疫检测法弥补了理化检测方法的缺憾，它最突出的优点是取样量少、前处理简单、容量大、仪器化程度低、灵敏度高，分析效率可达色谱分析方法的几十倍，适用于大批量样本敌百虫残留的快速筛选性检测。它可以同时测定大批量样品，用于大批量检测的初筛；投资少而且操作简便，适合基层监督部门使用。

在建立免疫学检测方法并应用该检测方法检测敌百虫残留量时，关键技术在于能够获取到特异性强、灵敏度高的抗体，而要实现这一目标，前提条件是制备出合适的敌百虫半抗原。然而，在这方面，相关的报道非常有限。因此，亟需进一步探索敌百虫半抗原的新的合成方法以及由此得到的新敌百虫半抗原，从而助力敌百虫残留的大批量快速筛选。

发明内容

为了克服现有技术中的上述缺陷，本发明人针对敌百虫的结构特点开发出了一种敌百虫半抗原的合成方法，并由此获得了一种新的敌百虫半抗原、抗原及其抗体。利用该敌百虫半抗原、抗原及其抗体，可以通过免疫检测的方式来对样品中的敌百虫进行有效检测。

因此，在本发明的第一方面，提供了一种敌百虫半抗原，其结构式如式(I)所示：

其中，所述R₁选自C₀-C₆亚烷基；R₂选自C₁-C₆亚烷基。

在本发明的第二方面，提供了一种用于制造本发明第一方面的敌百虫半抗原的中间体，其结构式如式(II)所示：

其中，R₁选自C₀-C₆亚烷基。

在本发明的第三方面，提供了一种制备本发明第一方面的敌百虫半抗原的方法，所述方法包括以下步骤：

步骤1：在低温下，使三氯化磷与结构式如的化合物1反应，经减压蒸馏后得到中间体1：