[发明专利]鉴定肝癌状态的方法和试剂盒

说明书

本文提供了一种用于鉴定肝癌状态的方法，其包括：1)检测来自所述受试者的生物样品中生物标志物基因的甲基化水平，其中所述生物标志物基因包括BMP4、COX2、EMX1、Septin9、SOCS1和TSPYL5基因中的一种或更多种；以及2)将步骤1)检测的甲基化水平与群体中相应生物标志物的正常甲基化水平进行比较，以确定所述受试者的肝癌状态。本文还提供了用于鉴定肝癌状态的试剂盒。本文所提供的方法和试剂盒为肝癌的预测、诊断、和评估提供了一条快速、可靠、准确的新途径。

技术领域

本文涉及在受试者中鉴定肝癌状态的方法和试剂盒，尤其是利用生物标志物基因的甲基化水平来鉴定肝癌状态的方法和试剂盒。

背景技术

原发性肝癌(primary liver cancer，PLC)简称肝癌，是全世界范围内常见的消化系统恶性肿瘤。根据GLOBOCAN 2018年公布的新数据，全球肝癌的年新发病例数达到84.1万人，居于恶性肿瘤第6位，死亡78.2万人，居于恶性肿瘤的第2位。原发性肝癌在我国尤其高发，是第4位的常见恶性肿瘤和第2位的肿瘤致死病因。我国人口仅占全球的18.4％，可是肝癌年新发病例达到46.6万人，死亡42.2万人，分别达到全球的55.4％和53.9％。总体上讲，肝癌的预后很差，发病率与死亡率之比达到1：0.9；在北美国家和地区5年生存率15％～19％，而在我国仅为12.1％；肝癌严重地威胁我国人民的生命和健康。在我国，肝癌的高危人群主要有乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)和/或丙型肝炎病毒(hepatitis Cvirus，HCV)感染、长期酗酒(酒精性肝病)、非酒精脂肪性肝炎、食用黄曲霉毒素污染的食物、血吸虫病等多种原因引起的肝硬化以及有肝癌家族史的人群。同时，年龄40岁以上的男性风险较大。近年的研究提示糖尿病、肥胖、吸烟和药物性肝损等也是肝癌的危险因素，值得关注。因此，对于男性35岁以上、女性45岁以上的肝癌高危人群，应定期进行筛查。超声影像检查是简便、实时、无创、敏感的方法，可以显示肝脏占位的部位、大小和形态，协助诊断和鉴别诊断。

诊断原发性肝癌的金标准仍然是病理组织学检查结果，但是由于约定俗成和多种原因，在全身各种恶性肿瘤中只有肝癌具有临床诊断标准，并且东西方国家的指南和共识都认可。《原发性肝癌诊疗规范(2019年版)》中肝癌的临床诊断标准为：

1)有乙型病毒性肝炎或丙型病毒性肝炎，或有任何原因引起肝硬化者，至少每隔6个月进行1次超声及血清AFP检测，发现肝内直径≤2cm结节，动态增强MRI、动态增强CT、超声造影或肝细胞特异性对比剂Gd-EOB-DTPA增强MRI 4项检查中至少有2项显示动脉期病灶明显强化、门静脉期和(或)平衡期肝内病灶强化低于肝实质即“快进快出”的肝癌典型特征，则可做出肝癌的临床诊断；对于发现肝内直径2cm结节，则上述4种影像学检查中只要有1项典型的肝癌特征，即可临床诊断为肝癌。

2)有乙型病毒性肝炎或丙型病毒性肝炎，或有任何原因引起肝硬化者，随访发现肝内直径≤2cm结节，若上述4种影像学检查中无或只有1项检查有典型的肝癌特征，可进行肝病灶穿刺活检或每2～3个月的影像学检查随访并结合血清AFP水平以明确诊断；对于发现肝内直径2cm的结节，上述4种影像学检查无典型的肝癌特征，则需进行肝病灶穿刺活检以明确诊断。

3)有乙型病毒性肝炎或丙型病毒性肝炎，或有任何原因引起肝硬化者，如血清AFP升高，特别是持续升高，应进行影像学检查以明确肝癌诊断；如未发现肝内结节，在排除妊娠、慢性或活动性肝病、生殖腺胚胎源性肿瘤以及消化道肿瘤的前提下，应密切随访血清AFP水平以及每隔2～3个月进行1次影像学复查。