[发明专利]鉴定肝癌状态的方法和试剂盒

权利要求书

1.在受试者中鉴定肝癌状态的方法，包括以下步骤：

1)检测来自所述受试者的生物样品中生物标志物基因的甲基化水平，其中所述生物标志物基因选自如下基因的一种或更多种：BMP4、COX2、EMX1、Septin9、SOCS1和TSPYL5；以及

2)将步骤1)检测的甲基化水平与群体中相应生物标志物的正常甲基化水平进行比较，以确定所述受试者的肝癌状态。

2.如权利要求1所述的方法，其中还包括在所述受试者接受医疗处理后再次进行步骤1)，并且将两次检测的甲基化水平进行比较，以鉴定所述受试者中肝癌状态的变化。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述肝癌状态包括肝癌的存在、进展和/或分期。

4.如权利要求1-3任一项所述的方法，其中步骤1)包括从所述生物样品提取DNA并以亚硫酸氢盐处理，使得所述DNA中的未甲基化胞嘧啶残基脱氨基，而甲基化的胞嘧啶残基保持不变，接着使用甲基化特异性引物以所述生物标志物基因或其片段为模板进行扩增反应来确定所述甲基化水平。

5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述生物标志物基因为：

COX2、Septin9和SOCS1；

BMP4、Septin9和TSPYL5；或者

BMP4、COX2、EMX1、Septin9、SOCS1和TSPYL5。

6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中步骤1)中用于BMP4基因甲基化水平检测的甲基化特异性引物对包括引物SEQ ID NO：7和8或引物SEQ ID NO：11和12；用于COX2基因甲基化水平检测的甲基化特异性引物对包括引物SEQ ID NO：15和16或引物SEQ ID NO：19和20；用于EMX1基因甲基化水平检测的甲基化特异性引物对包括引物SEQ ID NO：23和24或引物SEQ ID NO：27和28；用于Septin9基因甲基化水平检测的甲基化特异性引物对包括引物SEQ ID NO：31和32或引物SEQ ID NO：35和36；用于SOCS1基因甲基化水平检测的甲基化特异性引物对包括引物SEQ ID NO：39和40或引物SEQ ID NO：43和44；用于TSPYL5基因甲基化水平检测的甲基化特异性引物对包括引物SEQ ID NO：47和48或引物SEQ ID NO：51和52。

7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中步骤1)中还包括利用引物对SEQ ID NO：55和56对内参基因ACTB甲基化水平进行检测。

8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中步骤2)中诊断所述受试者的肝癌状态是根据所述生物标志物基因的甲基化水平通过逻辑回归进行的。

9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述生物样品选自所述受试者的血液、血清、血浆、腹水和活检组织。

10.用于在受试者中鉴定肝癌状态的试剂盒，包括用于检测来自所述受试者的生物样品中生物标志物基因甲基化水平的试剂，其中所述生物标志物基因选自如下基因的一种或更多种：BMP4、COX2、EMX1、Septin9、SOCS1和TSPYL5。

11.如权利要求10所述的试剂盒，其中所述生物标志物基因为：

COX2、Septin9和SOCS1；

BMP4、Septin9和TSPYL5；或者

BMP4、COX2、EMX1、Septin9、SOCS1和TSPYL5。

12.如权利要求10或11所述的试剂盒，其中用于检测甲基化水平的所述试剂包括用于通过扩增反应来确定所述甲基化水平的甲基化特异性引物对以及任选的亚硫酸氢盐。