[发明专利]分离病毒载体的方法

说明书

一种分离含有病毒载体的液体样品的方法包含使所述液体样品流到阴离子交换柱中。第一病毒载体含有靶向遗传物质，并且第二病毒载体基本上不含遗传物质或含有非靶向遗传物质，其中所述靶向遗传物质不同于所述非靶向遗传物质。可以使流动相流到所述阴离子交换柱中，其中所述流动相包含缓冲溶液A和缓冲溶液B。所述缓冲溶液A和B两者均包含挥发性缓冲盐。可以将所述第一病毒载体和所述第二病毒载体分离，使得所述第一病毒载体和所述第二病毒载体在不同时间从所述阴离子交换柱洗脱，并且然后可以检测所述第一病毒载体和所述第二病毒载体。

背景技术

离子交换色谱(IEC)是用于带电分子的化学分析和分离的广泛使用的分析技术。IEC涉及一种或多种分析物物种与样品中存在的其它基质组分的分离。分析物通常是离子的，使得其可以与固定相发生离子相互作用。在IEC中，用在理想情况下将以不同的亲和力水平与分析物和基质组分相互作用的离子部分使固定相衍生化。当使用盐梯度洗脱时，洗脱液渗透通过固定相并且与分析物和基质组分竞争与离子部分相互作用。当使用pH梯度洗脱时，洗脱液的pH会改变分析物的电荷，并且进而改变分析物与固定相的结合。为了参考，洗脱液是用于描述泵入到色谱柱入口的液体溶液或缓冲溶液的术语。在洗脱过程期间，分析物和基质组分将随着时间的变化从固定相洗脱并且然后在检测器处随后对分析物和基质组分进行检测。一些典型检测器的实例是电导率检测器、UV-VIS分光光度计和质谱仪。多年来，IEC已经发展成强大的分析工具，其可用于创造更健康、更清洁且更安全的环境，在所述环境中可以对复杂的样品混合物进行分离和分析以用于各个行业，如水质、环境监测、食品分析、制药以及生物技术。

使用病毒载体的基因疗法是迅速崛起的领域，有许多治疗方法正在开发中，并且几项最近获得了FDA批准。重组病毒载体可以用于封装基因组材料并将其递送到患者的细胞中以治疗疾病。理想情况下，最终产物由病毒载体颗粒组成，所述病毒载体和颗粒均含有治疗性遗传物质。然而，由于包装效率低或在加工和储存期间基因组材料会排出，因此病毒载体并不总是含有所期望的遗传物质(例如，DNA分子)。这些空病毒颗粒竞争相同的细胞受体，但不具有治疗功能。申请人认为，需要开发一种可以表征一批病毒载体，以确定与不含有靶向遗传物质或含有非靶向遗传物质的载体(例如，错误的遗传物质或靶向遗传物质的截断版本)相比含有遗传物质的载体的产率的方法。进一步地，申请人认为需要开发一种用于用与质谱兼容的工作流表征一批病毒载体的方法。

发明内容

在第一方面中，一种分离含有病毒载体的液体样品的方法包含使所述液体样品流到阴离子交换柱中。所述病毒载体包含第一病毒载体和第二病毒载体。所述第一病毒载体含有靶向遗传物质。所述第二病毒载体i)基本上不含遗传物质或ii)含有非靶向遗传物质。所述靶向遗传物质不同于所述非靶向遗传物质。可以使流动相流到所述阴离子交换柱中，其中所述流动相包含第一缓冲溶液A和第二缓冲溶液B的混合物。所述第一缓冲溶液A包含碳酸氢铵和氢氧化铵。所述第二缓冲溶液B包含乙酸和甲酸。将所述第一病毒载体和所述第二病毒载体分离，使得所述第一病毒载体和所述第二病毒载体在不同时间从所述阴离子交换柱洗脱。用检测器检测所述第一病毒载体和所述第二病毒载体。

关于第一方面中的任何方面，所述第一缓冲溶液A和所述第二缓冲溶液B各自不包含溶解在液体中的非挥发性缓冲盐。

关于第一方面中的任何方面，所述使所述流动相流到所述阴离子交换柱中包含从第一储存器泵出所述第一缓冲溶液A，其中所述第一缓冲溶液A具有第一pH值。可以从第二储存器泵出所述第二缓冲溶液B，其中所述第二缓冲溶液B具有第二pH值，并且所述第一pH和所述第二pH不同。可以将所泵出的第一缓冲溶液A和所泵出的第二缓冲溶液B合并以形成所述第一缓冲溶液A和所述第二缓冲溶液B的混合物，之后将所述混合物输入到阴离子交换柱中。可以随时间的变化针对所合并溶液改变所述第一缓冲溶液A和所述第二缓冲溶液B的比例。

关于第一方面中的任何方面，所述将所述所泵出的第一缓冲溶液A和所述所泵出的第二缓冲溶液B合并包含：在使所述所泵出的第一缓冲溶液A和所述所泵出的第二缓冲溶液B流到所述阴离子交换柱之前，在混合器中混合所述所泵出的第一缓冲溶液A和所述所泵出的第二缓冲溶液B。