[发明专利]用于有毒蘑菇环鳞鹅膏鉴定的引物组、试剂盒和方法

权利要求书

1.一种鉴定有毒蘑菇环鳞鹅膏的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)提取待测样品的基因组DNA；

2)采用引物组对提取的基因组DNA进行PCR扩增；

3)检测PCR扩增产物中是否含有目的扩增片段，含有目的扩增片段的样品鉴定为环鳞鹅膏阳性，所述目的扩增片段的大小为341bp；

所述引物组包括引物AconF、qAconR，其核苷酸序列为：

AconF：GTCTCTCTTCTTGCTTGTTTC，

qAconR：AAATCCAAAACACACTCAAAAAGAGC。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述PCR扩增的反应体系为：总体积25μl，其中，2×Taq PCR MasterMix 12.5μl、浓度为10μM的正反向引物各1μl、基因组DNA 1μl、余量为ddH₂O；

所述步骤2)中PCR扩增的反应条件为：94℃预变性3min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，35个循环。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤3)中采用琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物中是否含有目的条带。

4.一种鉴定有毒蘑菇环鳞鹅膏的实时荧光PCR方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)提取待测样品的基因组DNA；

2)采用引物组对提取的基因组DNA进行实时荧光PCR扩增，根据扩增结果判断待测对象是否含有环鳞鹅膏，如果Ct≤30则判断为环鳞鹅膏阳性；

所述引物组包括引物AconF、qAconR，其核苷酸序列为：

AconF：GTCTCTCTTCTTGCTTGTTTC，

qAconR：AAATCCAAAACACACTCAAAAAGAGC，

所述引物组还包括探针AconU，探针AconU的核苷酸序列为：AGGCAGCCTTGGCACTGTTCAGGT；

探针AconU的5’端标记荧光报告基团，3’端标记荧光淬灭基团。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述实时荧光PCR的反应体系为：总体积20μl，其中2×T5 Fast qPCR Mix 10μl、浓度为10μM的引物AconF/qAconR各1μl、浓度为10μM的探针AconU 0.5μl、基因组DNA 1μl，余量为ddH₂O；qPCR扩增程序为：95℃10min；95℃10s，60℃40s，40个循环。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述荧光报告基团为VIC，所述荧光淬灭基团为BHQ1。