[发明专利]一种利用脐带血单个核细胞生产自然杀伤细胞的方法

权利要求书

1.一种利用脐带血单个核细胞生产自然杀伤细胞的方法，其特征在于，包含以下步骤：

对脐带血进行分离处理得到脐带血单个核细胞；

对与所述脐带血同源的脐带进行分离处理与培养处理得到脐带间充质干细胞，所述分离与培养处理的第一完全培养基中包含一种或多种第一细胞因子；

对所述脐带血单个核细胞和所述脐带间充质干细胞进行共培养处理得到扩增后脐带血单个核细胞，所述共培养处理的第二完全培养基中包含一种或多种第二细胞因子；

将所述扩增后脐带血单个核细胞进行诱导分化处理得到NK细胞，所述诱导分化处理的诱导分化培养基中包含一种或多种第三细胞因子；

将所述NK细胞进行扩增处理得到扩增后NK细胞，所述扩增处理的扩增培养基中包含一种或多种第四细胞因子。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一完全培养基包含UltraCULTURESerum-free Medium无血清培养基、XF Basal Medium间充质干细胞无血清培养基、MSC XF基础培养基中的一种或多种，和/或

所述第一细胞因子包含Ultroser G serum substitute血清替代物、XF Supplements、MSC XF补充剂混合物；

所述第二完全培养基包含Stemline I扩增培养基、Stemline II扩增培养基、SFEM扩增培养基、SFEMII扩增培养基中的一种或多种，和/或

所述第二细胞因子包含SCF、G-CSF和GM-CSF；

所述诱导分化培养基包含RPMI 1640基础培养基、SCGM无血清培养基、KBM581无血清培养基、X-VIVO 10无血清培养基中的一种或多种，和/或

所述第三细胞因子包含Flt3L、SCF、OK432、IL-2、IL-7、IL-15和IL-21；和/或

所述扩增培养基包含SCGM无血清培养基、KBM581无血清培养基、X-VIVO 10无血清培养基中的一种或多种，和/或

所述第四细胞因子包含OK432、IL-2、IL-15及IL-21。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述第一完全培养基中各所述第一细胞因子的含量如下：Ultroser G serum substitute血清替代物含量以体积计为2.5％-10％、XFSupplements含量以体积计为2.5％-10％、MSC XF补充剂混合物含量以体积计为2.5％-10％；和/或

所述第二完全培养基中各第二细胞因子的含量如下：SCF含量为10-100ng/ml、G-CSF含量为10-100ng/ml、GM-CSF含量为10-100ng/ml；和/或

所述诱导分化培养基中各第三细胞因子的含量如下：Flt3L含量为5-15ng/ml、SCF含量为5-25ng/ml、OK432含量为1-20ug/ml、IL-2含量为100-1000IU/ml、IL-7含量为10-30ng/ml、IL-15含量为6-25ng/ml、IL-21含量为8-20ng/ml；和/或

所述扩增培养基中各第四细胞因子的含量如下：OK432含量为1-20ug/ml、IL-2含量为100-1000IU/ml、IL-15含量为5-50ng/ml、IL-21含量为5-50ng/ml。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述分离处理采用密度梯度离心法进行。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，经过所述共培养处理得到的所述扩增后脐带血单个核细胞中的单个核细胞数量为所述脐带血单个核细胞的单个核细胞的3-15倍。