[发明专利]一种从生腰果中制备高纯度致敏原Ana o 3的方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种从生腰果中制备高纯度过敏原Anao3的方法。包括以下步骤：步骤(1)、脱脂腰果粉的制备：将生腰果于液氮内粉碎至糊状后进行脱脂、干燥，得脱脂腰果粉；步骤(2)、腰果粗蛋白的制备：将步骤(1)的脱脂腰果粉于提取液中进行蛋白提取，然后依次经离心、取上清液透析、冷冻干燥，得到粗蛋白冻干粉；步骤(3)、过敏原Anao3提纯：将步骤(2)的粗蛋白冻干粉经弱阴离子交换层析，得到高纯度过敏原Anao3。本发明采用低浓度盐溶液提取与阴离子交换层析相结合的方法提取高纯度的腰果过敏原Anao3，为腰果过敏研究及过敏原Anao3特性研究提供样品。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种从生腰果中制备高纯度致敏原Ana o 3的方法。

背景技术

世界卫生组织和联合国粮农组织(WHO/FAO)将树坚果归类为保健食品，在过去几年时间里腰果和其他树坚果的消费量一直在增加，和花生过敏相似，树坚果过敏是常见的，且临床过敏表现较为严重，难以解决。坚果和花生是导致严重过敏以及并发症的主要原因，并占食物致死性案例的绝大部分，腰果也会通过交叉反应对相当一部分的过敏人群构成健康风险，流行病学研究发现，欧美等发达国家腰果过敏的发病率占坚果类过敏的15-30％。

Ana o 3是腰果临床过敏的主要致敏原，其分子量为12.6kDa。高纯度的过敏原蛋白Ana o 3在食品过敏原定性定量检测、腰果致敏反应机制及低致敏食物的开发中是不可或缺的；目前，高纯度Ana o3的制备尚未有成型的方法，而国内外对过敏原的检测方法都需要致敏蛋白的 标准品作为内标或外标定量，或者作为阳性对照，因此高纯度的Ana o 3的制备是迫切的。

发明内容

针对上述存在的技术不足，本发明提供了一种从生腰果中制备高纯度致敏原Anao 3的方法，本发明采用低浓度盐溶液提取与阴离子交换层析相结合的方法提取高纯度的腰果过敏原Ana o 3，为腰果过敏研究及过敏原Ana o 3特性研究提供样品。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：

一种从生腰果中制备高纯度致敏原Ana o 3的方法，包括以下步骤：

步骤(1)、脱脂腰果粉的制备：将生腰果于液氮内粉碎至糊状后进行脱脂、干燥，得脱脂腰果粉；

步骤(2)、腰果粗蛋白的制备：将步骤(1)的脱脂腰果粉于提取液中进行蛋白提取，然后依次经离心、取上清液透析、冷冻干燥，得到粗蛋白冻干粉；

其中，所述提取液采用浓度为10-50mmol/L、pH为7.0-7.4的磷酸盐缓冲液；

步骤(3)、过敏原Ana o 3提纯：将步骤(2)的粗蛋白冻干粉经弱阴离子交换层析，得到高纯度过敏原Ana o3 。

优选的，所述步骤(1)中脱脂、干燥的方法为：将糊状的生腰果加入至沸程为30-60℃的石油醚中脱脂2-6h，然后于4-25℃下离心去除油脂，重复上述脱脂离心操作后，将石油醚于自然条件下风干；

其中，果粉的质量与石油醚的体积比为1g：5-10mL。

优选的，所述步骤(2)中脱脂腰果粉的质量与磷酸盐缓冲液的体积之比为1g：10-20mL。

优选的，所述步骤(2)中蛋白提取的方法为：将步骤(1)的脱脂腰果粉与磷酸盐缓冲液混合均匀，并于4℃条件下磁力搅拌6-12h。

优选的，所述步骤(2)中离心的条件为：于6000-11000r/min、4℃条件下离心10-30min。

优选的，所述步骤(2)中透析的方法为：采用6-8KD的透析袋，于4℃下，于蒸馏水中磁力搅拌透析10-24h。