[发明专利]一种胰腺癌循环肿瘤细胞检测试剂盒及其应用方法

说明书

本发明公开了一种胰腺癌循环肿瘤细胞检测试剂盒，包括：微流控芯片、生物素标记的抗体、抗体稀释液、样本稀释液、细胞固定液、细胞通透液和细胞荧光染色液，微流控芯片的结构片上有设置有纳米微阵列通道，微阵列通道上包被有链酶亲和素磁微粒。本发明还公开了一种胰腺癌循环肿瘤细胞检测试剂盒的应用方法。本发明相较于现有技术，可用于检测胰腺癌循环肿瘤细胞，具有较高的敏感性和特异性，捕获分离出的细胞保持完整性，可用于后续的细胞分析，便于胰腺癌早期诊断、病理分型、病程分期及疗效评估。

技术领域

本发明属于循环肿瘤细胞检测领域，尤其涉及一种胰腺癌循环肿瘤细胞检测试剂盒及其应用方法。

背景技术

肿瘤是一类严重威胁人类健康，具有高发病率和高死亡率的疾病。胰腺癌是一种恶性程度极高的消化系统肿瘤，由于早期无明显症状、疾病进展快及化疗有效率低，患者预后极差。

循环肿瘤细胞(circulating tumor cell，CTC)可对多种肿瘤细胞展开分析，可先于影像学诊断发现微小病灶，目前已成为多种肿瘤疾病进展浸润及不良预后判断的重要依据。循环肿瘤细胞在肿瘤早期诊断、个体化治疗/疗效评估及肿瘤转移机制研究等方面具有重要价值。然而由于其在人体循环系统中所占比例极低，循环肿瘤细胞的分离和鉴定成为临床应用的难点。循环肿瘤细胞的异质性使得传统的依赖上皮特异性抗原表达来鉴定CTC的方法应用受到限制，只能检测到EpCAM阳性的细胞，无法检测EpCAM阴性的细胞。流式细胞法(Flow cytometry，FCM)是基于荧光标记的单克隆抗体与细胞表面的特定抗原结合的原理，通过流式细胞仪对细胞进行分析的方法。流式细胞分析法的检测速度快，可实现肿瘤细胞的定量检测，还可对同一个细胞做多参数分析。

微流控芯片是一种技术先进的CTCs分离方法，能够单独操作和处理细胞，并精确捕获混合物中的稀有细胞，能够高效地从血液中分离活的癌细胞。微流控芯片管道可依据细胞大小来设计，也可利用免疫磁珠连同抗体的特异性结合来分离CTCs，通过抗原抗体结合捕获的CTCs可使用胰蛋白酶将其释放。微流控芯片具有灵敏度高，成本低，设备微型等优势，且不破坏细胞形态，分离出的CTCs可用于后续的体外培养和细胞分析。

现有技术中，缺少能够检测胰腺癌循环肿瘤细胞的试剂盒，不利于胰腺癌早期诊断、病理分型、病程分期及疗效评估。

发明内容

本发明的目的在于：提供一种胰腺癌循环肿瘤细胞检测试剂盒及其应用方法，可用于检测胰腺癌循环肿瘤细胞，具有较高的敏感性和特异性，捕获分离出的细胞保持完整性，可用于后续的细胞分析，便于胰腺癌早期诊断、病理分型、病程分期及疗效评估。

为了实现上述目的，一方面，本发明提供了一种胰腺癌循环肿瘤细胞检测试剂盒，包括：微流控芯片、生物素标记的抗体、抗体稀释液、样本稀释液、细胞固定液、细胞通透液和细胞荧光染色液，微流控芯片的结构片上有设置有纳米微阵列通道，微阵列通道上包被有链酶亲和素磁微粒。

作为上述技术方案的进一步描述：

生物素标记的抗体的组分包括含有生物素标记的鼠抗HLA-G抗体、生物素标记的鼠抗CA19-9抗体和生物素标记的鼠抗CA125抗体。

作为上述技术方案的进一步描述：

抗体稀释液的组分包括Tris-HCL缓冲液、牛血清白蛋白和叠氮钠。

作为上述技术方案的进一步描述：

样本稀释液为磷酸盐缓冲液。

作为上述技术方案的进一步描述：

细胞固定液为4％多聚甲醛液。

作为上述技术方案的进一步描述：

细胞通透液0.2％Triton-X100。

作为上述技术方案的进一步描述：