[发明专利]CAMTA2基因缺失型斑马鱼的构建方法在审
| 申请号： | 202111257929.9 | 申请日： | 2021-10-27 |
| 公开（公告）号： | CN114085840A | 公开（公告）日： | 2022-02-25 |
| 发明（设计）人： | 谢立;龚克;谢婷;罗勇;郭慧;王磊 | 申请（专利权）人： | 中南大学湘雅二医院 |
| 主分类号： | C12N15/12 | 分类号： | C12N15/12;C12N15/11;C12N15/113;C12N9/22;C12N15/89;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 赵青朵 |
| 地址： | 410000 湖南*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | camta2 基因 缺失 斑马 构建 方法 | ||
1.斑马鱼CAMTA2基因的靶位点，其包括如下位点中至少一种：
靶位点1，其具有如SEQ ID NO:1所示的核酸序列；
靶位点2，其具有如SEQ ID NO:2所示的核酸序列；
靶位点3，其具有如SEQ ID NO:3所示的核酸序列；
靶位点4，其具有如SEQ ID NO:4所示的核酸序列。
2.权利要求1所述靶位点的扩增引物，其包括：
扩增靶位点1的引物对，其包括如SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6所示的核酸序列的两条引物；
扩增靶位点2的引物对，其包括如SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7所示的核酸序列的两条引物；
扩增靶位点3的引物对，其包括如SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8所示的核酸序列的两条引物；
扩增靶位点4的引物对，其包括如SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:9所示的核酸序列的两条引物。
3.靶向权利要求1所述靶位点的sgRNA，其包括：
靶向靶位点1的sgRNA1，其具有如SEQ ID NO:10所示的核酸序列；
靶向靶位点2的sgRNA2，其具有如SEQ ID NO:11所示的核酸序列；
靶向靶位点3的sgRNA3，其具有如SEQ ID NO:12所示的核酸序列；
靶向靶位点4的sgRNA4，其具有如SEQ ID NO:13所示的核酸序列。
4.重组载体，其包括骨架载体和权利要求3所述的sgRNA片段。
5.敲除斑马鱼CAMTA2基因的试剂，其包括：Cas9蛋白和权利要求3所述的sgRNA。
6.根据权利要求5所述的试剂，其特征在于，其包括水和200ng/L Cas9蛋白、60～80ng/LsgRNA1、60～80ng/LsgRNA2、60～80ng/LsgRNA3和60～80ng/L sgRNA4。
7.CAMTA2基因缺失型斑马鱼的构建方法，其特征在于，以权利要求5或6所述的试剂，敲除斑马鱼受精卵中的CAMTA2基因。
8.根据权利要求7所述的构建方法，其特征在于，所述斑马鱼受精卵为受精0.5h内的斑马鱼受精卵。
9.根据权利要求7或8所述的构建方法，其特征在于，所述试剂的用量为每个斑马鱼受精卵1nL试剂。
10.根据权利要求7或8所述的构建方法，其特征在于，还包括筛选的步骤，所述筛选采用PCR和测序。
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